細胞簡介 ：

膀胱癌是一種泌尿生殖係統腫瘤 ，發病率和死亡率較高 ，膀胱癌分為非肌浸潤性膀胱癌與肌肉浸潤性膀胱癌 。

腫瘤微環境理論認為 ，腫瘤微環境與細胞外基質是腫瘤對化療反應的重要決定因素 。腫瘤微環境包括和非細胞 ，以及細胞外成分 ，在腫瘤複發和轉移中起著重要的作用 。其中 ，非細胞主要由腫瘤相關成纖維細胞構成 。

成纖維細胞是實體瘤中主要的細胞 ，它們結合結締組織的細胞外基質 ，是組織結構完整性的基礎 。已有研究表明 ，腫瘤相關成纖維細胞是腫瘤演進的重要促進劑 ，它們可通過分泌一種或多種可溶性因子如細胞因子 、生長因子 、趨化因子和基質降解酶等 ，腫瘤細胞響應這些可溶性因子作用 ，進而改變腫瘤細胞的生長方式機器發展演進過程 。

細胞特性 ：

1）細胞來源於手術切除的膀胱癌組織 。

2)細胞鑒定 ：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：成纖維樣細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 delf 原代成纖維細胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)檢測試劑盒  ，英文名 ： 1,3-βD glucosidase ELISA Kit

Mouse calcitonin (CT) ELISA Kit 小鼠降鈣素(CT)檢測試劑盒

MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit 小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶複合物

通用型總脂蛋白(TotalL-Cholesterol)酶連續循環比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitIgE大鼠免疫球蛋白E

DPP4重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 Protein

趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)

CGA重組人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白  Protein

GFRA3 Protein Human 重組人 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 標簽)

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)

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小鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA 試劑盒

Human deoxypyridinoline / deoxypyridinoline (DPD) ELISA Kit 人脫氧酚/脫氧啉(DPD)檢測試劑盒

HumaniggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit 人髓係細胞觸發受體-1(EM-1)檢測試劑盒 進口分裝

HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9檢測試劑盒人糖鏈抗原19-9(CA19-9)檢測試劑盒

重組逆轉錄病毒載體轉染試劑盒10次

HumansolubleFactor-relatedApoptosisligand,sFASL/Apo-1ELISAKit人可溶性凋亡相關因子配體(sFASL)檢測試劑盒

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注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。