老哥俱乐部

细胞简介：

乳腺癌是一种严重影响女性健康甚至危及生命的恶性肿瘤之一，其发展不仅是肿瘤细胞本身的作用，而且与肿瘤微环境密切相关。

癌组织由实质和间质两部分构成，癌细胞构成癌实质，是癌的主要成分
，具有组织来源特异性，癌间质一般由结缔组织和血管组成，起支持和营养癌实质的作用
，不具有特异性
。

当实体瘤超过 1-2mm时
，需要通过新生的血管和活化的癌相关成纤维细胞来获取癌细胞生长和增殖所必须的营养物质

。其中
，癌相关成纤维细胞可通过分泌多种细胞因子和生长因子来发挥促进癌血管生成的作用。

细胞特性
：

1）细胞来源于人乳腺癌组织。

2)细胞鉴定
：Vimentin荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%

。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式：梭形细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠结蛋白(Des)ELISA 试剂盒

Rat ai ypsin (AT) ELISA Kit 大鼠抗(AT)检测试剂盒

HumanCollectinELISAKit 人胶原凝集素(Collectin)检测试剂盒 进口分装

Humanai-cellmembraneDNAaibody,cmDNA检测试剂盒人抗细胞膜DNA抗体(cmDNA)检测试剂盒

植物原生质细胞分离试剂盒5次

Humanα-Amylase
，AMS/AMYELISAKit人α(AMS/AMY)检测试剂盒

CD5重组大鼠 CD5 蛋白  Protein

FLG(filaggrin 0.5mgFLG(filaggrin)peptide 丝聚蛋白/中间丝蛋白抗原

CD164重组人 CD164 / Endolyn 蛋白 (His 标签) Protein

ADM Protein Human 重组人 ADM / Adrenomedullin 蛋白

FGFR1 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 标签)

FLG(filaggrin 0.5mgFLG(filaggrin)peptide 丝聚蛋白/中间丝蛋白抗原

ADM Protein Human 重组人 ADM / Adrenomedullin 蛋白

CD5重组大鼠 CD5 蛋白  Protein

FGFR1 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 标签)

CD164重组人 CD164 / Endolyn 蛋白 (His 标签) Protein

植物玉米素(Z)检测试剂盒

Human ai rubella virus IgG aibody (ai-RV IgG) ELISA Kit 人抗风疹病毒IgG抗体(ai-RV IgG)检测试剂盒

Porcinemacrophageinflammatoryprotein1α,MIP-1αELISAKit 猪巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAGA(Humanai-gliadinaibody)ELISAKit人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体

血液糖类总量铁比色法定量检测试剂盒20次

Mousethyroxine,T4ELISAKit小鼠甲状腺素(T4)检测试剂盒

人乳腺癌相关成纤维细胞植物A检测试剂盒   植物A试剂盒   规格型号
：96T/48T   植物A试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名：植物A试剂盒、植物A 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

大鼠白三烯B4检测试剂盒   大鼠白三烯B4试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠白三烯B4试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠白三烯B4试剂盒、大鼠白三烯B4 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

大鼠金属硫蛋白检测试剂盒   大鼠金属硫蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠金属硫蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：大鼠金属硫蛋白试剂盒、大鼠金属硫蛋白检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期


：6个月。

大鼠白三烯C4检测试剂盒   大鼠白三烯C4试剂盒   规格型号
：96T/48T   大鼠白三烯C4试剂盒

，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：大鼠白三烯C4试剂盒、大鼠白三烯C4 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。