老哥俱乐部

细胞简介：

食管纤维瘤来源于食管肌层，多数位于食管下段，肿瘤体硬，呈膨胀性生长。一般病程较长，数月直数年不等，为常见的良性食管肿瘤，多发性
。体外分离和培养食管纤维瘤细胞，为研究食管纤维瘤生物学特性、机理等奠定了实验基础
。

细胞特性：

1）细胞来源于人食管肿瘤组织。

2）不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

3）细胞生长方式：长梭形
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代肿瘤细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

GFAPELISAKit

大鼠白血病抑制因子受体(LIFR)elisa分析检测试剂盒

LIFR ELISA Kit

人基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)elisa分析检测试剂盒

HumanTIMP-3ELISAKit

运动神经元生存蛋白1  Anti-SMN1

磷酸化染色体浓缩调控蛋白1抗体  Anti-Phospho-RCC1 (Ser11)

细胞粘附分子3抗体（受体相关蛋白3）  Anti-Nectin 3

锌指蛋白146抗体  Anti-ZNF146

鱼热休克蛋白40(HSP-40)elisa分析检测试剂盒

HSP-40 ELISA Kit

人肠道病毒71型(EV71)抗体(IgM)elisa分析检测试剂盒

Humanenterovirus71virus(EV71)antibody(gM)ELISAkit

糖原磷酸化酶a（GPa）试剂盒

细胞牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）

溶酶体膜通透性（LMP）吖啶橙荧光检测试剂盒

大鼠肿瘤坏死因子γ(TNF-γ)elisa检测试剂盒

NDUFS8蛋白抗体

NDUFS8

6号染色体开放阅读框57抗体

C6orf57

微管蛋白4α抗体  Anti-TUBA4A

磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体  Anti-phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228)

少突胶质细胞转录因子2抗体  Anti-OLIG2

分泌细胞凋亡相关蛋白1抗体  Anti-SFRP2/SARP1

碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗人IgG H&L

猴补体蛋白5(C5)elisa生化检测试剂盒

C5 ELISA kit

人儿茶酚抑素elisa生化检测试剂盒

人食管纤维瘤细胞HumancatestatinELISAKit

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。