細胞簡介 ：

‍癌組織由實質和間質兩部分構成 ，癌細胞構成癌實質 ，是癌的主要成分 ，具有組織來源特異性 ，癌間質一般由結締組織和血管組成 ，起支持和營養癌實質的作用 ，不具有特異性 。

當實體瘤超過 1-2mm時 ，需要通過新生的血管和活化的癌相關成纖維細胞來獲取癌細胞生長和增殖所必須的營養物質 。其中 ，癌相關成纖維細胞可通過分泌多種細胞因子和生長因子來發揮促進癌血管生成的作用 。

上皮間質轉化（ EMT）是一種胚胎發育期的表型轉化 ，在腫瘤轉移過程中也能觀察到相似的EMT過程 。而由上皮和間質相互作用所形成的腫瘤-宿主界麵微環境的平衡狀態直接決定腫瘤的發展 。多種因素可影響該界麵 ，其中癌相關成纖維細胞是數量豐富的基質細胞 ，在調節腫瘤細胞EMT過程中發揮重要作用 。它通過細胞與細胞間相互接觸及分泌各種細胞因子 、蛋白酶類等 ，促進上皮細胞及其細胞惡性轉化 ，並對界麵各組分產生重要的調控作用 。

細胞特性 ：

1）細胞來源於人手術胃癌組織 。

2）細胞鑒定 ：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性 。

3）經鑒定細胞純度高於90% 。

4）不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5）細胞生長方式 ：長梭形 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 delf 原代成纖維細胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

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QSPlasmidMaxiKit   10T

血液(溶液型）   10ml（血量）

Relax-ISOBloodDNAKitI   50ml（血量）

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。