老哥俱乐部

细胞简介：

小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连
，是食物消化吸收的主要场所。一般根据形态和结构变化将小肠分为三段，分别为十二指肠，空肠和回肠。

小肠壁结构一般分 4层
，由外向内依次为：浆膜层，平滑肌层，粘膜下层和粘膜层
。粘膜层又分为3层：靠近粘膜下层的是一层平滑肌，称为粘膜肌层。其次为结缔组织，又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘膜
。

小肠粘膜有纵行和横行皱襞

，并有无数细小的指状突起，称为绒毛。绒毛的基底处粘膜内陷成管状，称为利贝屈恩氏隐窝
。隐窝基底部的上皮细胞不断地进行有丝分裂，产生新细胞

。隐窝上皮中还有许多杯状细胞

，它分泌粘液，起滑润食物和保护粘膜的作用。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常小肠组织
。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s

，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次

，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

小鼠乙酰（Ach）elisa检测试剂盒

小鼠程序性死亡1(PD-1)elisa检测试剂盒

大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)elisa分析检测试剂盒

脘蛋白基因变异分析试剂盒

人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)elisa检测试剂盒

细胞IGF 蛋白表达荧光定量检测试剂盒

绵羊补体片段3a(C3a)elisa检测试剂盒

SOB培养基SOB Broth 250g

小鼠几丁质酶1(CHIT1)elisa检测试剂盒

2型肾上腺皮质症蛋白抗体

6号染色体开放阅读框195抗体 C6orf195

基质金属蛋白酶27抗体 MMP27

甲硫腺苷转移酶2β亚基/MAT IIβ抗体 MAT2B

RAN结合蛋白1抗体 RanBP1

Rh血型C抗原抗体 RHCE

丝消旋酶抗体 Serine racemase

羧肽酶CPO抗体 Carboxypeptidase O

FITC标记小鼠CD154单克隆抗体 Mouse CD154/FITC

G0/G1期开关调节蛋白2抗体 G1switch 2

膜孕受体α/mPRα抗体 MPRA

电子转移黄素蛋白α抗体 ETFA

多囊肾因子1蛋白抗体 PKD2L1

嗅觉受体5K4抗体 OR5K4

胰腺癌转移相关蛋白RLLM1抗体 RLLM1

大鼠总胆汁酸(TBA)elisa检测试剂盒

KIAA1731蛋白抗体

KIAA1731

趋化因子受体D6抗体

人小肠粘膜上皮细胞Chemokine Receptor D6

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。