老哥俱乐部

细胞简介：

肠指的是从胃幽门至的消化管。肠是消化管中长的一段，也是功能重要的一段
。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠 3大段。

肠壁结构一般分 4层，由外向内依次为
：浆膜层，平滑肌层，粘膜下层和粘膜层。粘膜层又分为3层

：靠近粘膜下层的是一层平滑肌，称为粘膜肌层。其次为结缔组织
，又称为固有层
。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘膜。小肠粘膜有纵行和横行皱襞，并有无数细小的指状突起
，称为绒毛。绒毛的基底处粘膜内陷成管状，称为利贝屈恩氏隐窝
。

隐窝基底部的上皮细胞不断地进行有丝分裂，产生新细胞。隐窝上皮中还有许多杯状细胞，它分泌粘液

，起滑润食物和保护粘膜的作用。大肠内无绒毛
，其大部分上皮细胞分泌粘液。直肠的上皮细胞也分泌粘液
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物兔的肠道组织。

2)细胞鉴定： 角蛋白 (PCK)荧光染色法 。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和

。

5)细胞生长方式：上皮样，贴壁培养


。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

Pigc-fosELISAKit

大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa分析检测试剂盒

Rat DPPⅣ ELISA Kit

山羊睾酮(T)elisa分析检测试剂盒

GoatTestosteroneELISAKit

冰冻切片组织DHPR受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒

苹果酸脱氢酶MDH测试盒测组织 50管/48样 紫外比色法

超微量ATP酶测试盒测Ca2+－ATP酶 50管/25样 100管/50样 比色法

小鼠抗肌蛋白(UTRN)elisa检测试剂盒

血清淀粉样蛋白A(SAA)elisa分析检测试剂盒

SAA ELISA Kit

人蛋白水解诱导因子/皮离蛋白(PIF/DCD)elisa分析检测试剂盒

HumanPIF/DCDELISAKit

维生素B12高效液相色谱法定量检测试剂盒

豚鼠胆囊收缩素A受体(CCKAR)elisa检测试剂盒

大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)elisa检测试剂盒

植物氧化应激活性氧（ROS）比色法测定试剂盒（单线态氧气）

粘蛋白19抗体

MUC19

补体C2b链多肽抗体

C2b

转录延伸调节蛋白1抗体  Anti-TCERG1/CA150

环指蛋白2抗体  Anti-RING2/RNF2

钠钙交换蛋白2抗体  Anti-NCX2/SLC8A2

染色体结构维持蛋白1抗体  Anti-SMC1

辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG H&L

鱼胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)elisa生化检测试剂盒

IGF-1R ELISA Kit

人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)elisa生化检测试剂盒

兔肠粘膜上皮细胞HumanPRF1/PFPELISAKit