老哥俱乐部

细胞简介：

血液中的单核细胞来源于骨髓干细胞分化出的髓样干细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分。单核细胞能吞噬异物产生抗体，在机体损伤治愈、抗御病原的入侵和对的方面起着重要的作用。机体发生炎症或其他都可引起单核细胞总数百分比发生变化，因此检查单核细胞计数成为辅助诊断的一种重要方法。

细胞特性

：

1）组织来源于实验动物的正常外周血组织。

2)细胞鉴定：MO-1或MO-2荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV

、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：圆形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 巨噬 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二
、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

豚鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA 试剂盒

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HumanprocollagenⅢN-terminalpeptide，PⅢELISAKit人Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)检测试剂盒

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MSLN重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 , Biotinylated Protein

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趋化因子C-C-基元受体3(CCR3)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-C-Motif Receptor 3 (CCR3)

AKT1 Protein Human 重组人 AKT1 / PKB / PKBα 蛋白 (His 标签)

DPP7重组人 DPP7 / DPPII / DPP2 蛋白 (His 标签) Protein

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

MSLN重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 , Biotinylated Protein

猪白介素6(IL-6)ELISA 试剂盒

Human ai EB virus aibody (EBV) ELISA Kit 人抗EB病毒抗体(EBV)检测试剂盒

Porcineplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit 猪纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforALDELISAKit大鼠固同

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人胰岛素原(PI)ELISAKit   ELISA. 

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