老哥俱乐部

细胞简介：

胆囊，是位于右方肋骨下肝脏后方的梨形囊袋构造
，有浓缩和储存胆汁之作用。胆囊壁由粘膜
、肌层和外膜三层组成。

胆囊内面以粘膜覆盖，有发达的皱襞
。胆囊收缩排空时
，皱襞高大而分支
；胆囊充盈时，皱襞减少变矮。粘膜上皮为单层柱状，内分散分部着少量杯状细胞。

胆囊粘膜细胞具有典型的吸收型细胞的特征
，具有较强的吸收和浓缩功能
，上皮细胞吸收胆汁中的水和无机盐，经细胞侧面的质膜转运至上皮细胞间隙内，吸收的水和无机盐通过基膜进入固有层的血管和管内。同时，胆囊粘膜亦有分泌功能
，分泌粘液。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物正常胆囊组织
。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白19（CK-19）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：上皮样

，多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一

、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)elisa检测试剂盒

大鼠凋亡诱导因子(AIF)elisa检测试剂盒

小鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)elisa检测试剂盒

人八聚体转录因子(OTF2B)elisa检测试剂盒

组织硝酸盐含量荧光定量检测试剂盒

小鼠WAP四二硫化物核心域蛋白1(WFDC1)elisa检测试剂盒

载玻片细胞TRAIL 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

绵羊白蛋白(Albumin)elisa分析检测试剂盒

GSK3B相互作用蛋白抗体 NIN

G蛋白偶联受体35抗体 GPR35

脑肠肽抗体 Ghrelin

酿酒酵母NAS6蛋白抗体 NAS6

二酰基甘油酰基转移酶2样蛋白4抗体 DGAT2L4

防御素β-119/β-defensin 119抗体 DEFB119

羊毛甾醇14α-去甲基化酶蛋白抗体 CYP51A1

胰腺抗体 Pancreatic hormone

SGCE蛋白抗体 SGCE

S腺苷L-型半胱水解酶抗体 SAHH

源盒蛋白Meis1抗体 MEIS1

脱氧胞苷脱氨酶蛋白抗体 APOBEC3G

胶质细胞谷运载蛋白3/神经/上皮细胞谷运载蛋白抗体 EAAT3

精神分裂症易感基因抗体 DTNBP1

6号染色体开放阅读框204抗体 C6orf204

AF680标记的波形蛋白抗体 Vimentin, Alexa Fluor 680 conjugated

细胞琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒

羊白介素7(IL7)elisa生化检测试剂盒

IL7 ELISA kit

人膀胱癌抗原(UBC)elisa生化检测试剂盒

兔胆囊上皮细胞UBCELISAKit