實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

肝卵原細胞是肝髒中一種具有強大增值能力和分化潛能的幹細胞 ，在肝髒發生損傷和缺失後 ，肝髒之所以有強大的再生和修複能力是肝髒中幹細胞發揮作用 。在肝髒受到嚴重急性損傷時 ，肝卵圓細胞被活化 ，可以分化為肝實質細胞和肝內膽管上皮等多種功能性細胞 ，修複肝髒的損傷 。肝卵圓有肝內和肝外兩個來源 。此外肝卵圓細胞與原發性肝癌的發生也有著密切的關係 ，對肝卵圓細胞的研究在多個方麵都有著重要的意義 。

細胞特性 ：

1）組織來源於處理後大鼠的肝組織 。

2)細胞鑒定 ：c-kit或AFP熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：多角形細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 DELF 原代肝卵圓細胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠胰腺再生蛋白Iα(REG1α)檢測試劑盒  ，英文名 ： REG1α ELISA Kit

Mouse endotoxin (ET) ELISA Kit 小鼠內毒素(ET)檢測試劑盒

MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAkit 小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanD-Dimer,D2DELISAKit人D二聚體

細胞AMPK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPPAR-α大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α

NA重組甲型流感 H9N2 神經酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

pre-X protein(CT 0.5mgpre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus] 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)

TNFRSF1A重組人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 標簽) Protein

FGF7 Protein Human 重組人 FGF7 / FGF-7 / KGF 蛋白 (His 標簽)

DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白

pre-X protein(CT 0.5mgpre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus] 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)

FGF7 Protein Human 重組人 FGF7 / FGF-7 / KGF 蛋白 (His 標簽)

NA重組甲型流感 H9N2 神經酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白

TNFRSF1A重組人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠膽囊收縮素8(CCK-8)檢測試劑盒

Rat thrombin receptor () ELISA Kit 大鼠受體()檢測試劑盒

HumanN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKIT 人N端前腦素(-proBNP)檢測試劑盒 進口分裝

HumanAialNaiureticPeptide,ANP檢測試劑盒人心肽(ANP)檢測試劑盒

植物源性食品羽扇豆(lupine)試劑盒20次

Humahrombopoietin ，TPOELISAKit人血小板生成素(TPO)檢測試劑盒

兔肝卵圓細胞微量二（MDA）測定試劑盒（TBA法）

總合成酶（NOS）測試盒[測總NOS（T－NOS）]

C（抗壞血酸）（VitaminC）測定試劑盒（比色法）

酯酶（CHE）測定試劑盒（比色法）

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。