老哥俱乐部

细胞简介：

骨膜是覆盖在骨质表面的一层结缔组织。骨膜通过夏皮式纤维锚定在骨质上，充当外部肌肉组织和内部骨质的连接桥梁

，这种结构有助于维持骨膜的完整性。

骨膜由两部分组成
，外层疏松的纤维层与内层致密的细胞层，纤维层中含有成纤维细胞、胶原纤维、弹力纤维及微管等
。细胞层中多为骨膜源干细胞，这种干细胞与骨髓来源的间充质干细胞类似，具有多向分化的潜能。

骨质修复、重塑和更新与骨膜中的干细胞密切相关。在正常生理状况下，骨膜组织发挥着维持骨质更新及重塑的作用，其中的干细胞既可以通过膜内成骨方式分化为成骨细胞
，也可通过软骨内成骨方式分化为软骨细胞
。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物正常关节骨膜组织


。

2)细胞鉴定
：CD90或CD73荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代间充质干细胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠甘露聚糖结合凝集素关联丝酸蛋白酶1(MASP1)检测试剂盒
，英文名： MASP1 ELISA Kit

Rat alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 大鼠αS转移酶(α-GST)检测试剂盒

Rateosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit 大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforE(Mouseesogen)ELISAKit小鼠雌激素

细胞培养污染性支原体属(Mycoplasma)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20次

RatImmunoglobulinA,IgAELISAKit大鼠免疫球蛋白A(IgA)检测试剂盒

ST6GAL1重组小鼠 ST6GAL1 / CD75 蛋白 (His 标签) Protein

RAS癌基因家族成员RAB37(RAB37)重组蛋白 Recombinant RAB37, Member RAS Oncogene Family (RAB37)

CRELD1重组人 CRELD1 蛋白 (His 标签) Protein

ALDH1A3 Protein Human 重组人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 标签)

PDGFB Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 PDGFB / PDGF-BB 蛋白

乙酰基酶(DLAT)重组蛋白 Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)

ALDH1A3 Protein Human 重组人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 标签)

IL13重组小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

CD38 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 SCARB3 蛋白

NRN1L重组人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白  Protein

猪补体片断3b(C3b)ELISA 试剂盒

Human Legionella aibody IgG (LP Ab-IgG) ELISA Kit 人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)检测试剂盒

Porcinediamineoxidase,DAOELISAKit 猪氧化酶(DAO)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforALOX-5(Humanarachidonate5-lipoxygenase)ELISAKit人花生四烯酸5脂加氧酶

血液卵0脂乙酰转移酶(LCAT)活性酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

Mouseαmannosidase,αManaseELISAKit小鼠α甘露糖苷酶(αManase)检测试剂盒

兔骨膜干细胞中文名称   方法   规格

小鼠糖皮质类固醇受体(GR)ELISAKit   ELISA. 

小鼠黄体生成素释放激素(LHRH)ELISAKit   ELISA. 

小鼠脑红蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.