細胞簡介 ：

骨膜是覆蓋在骨質表麵的一層結締組織 。骨膜通過夏皮式纖維錨定在骨質上 ，充當外部肌肉組織和內部骨質的連接橋梁 ，這種結構有助於維持骨膜的完整性 。

骨膜由兩部分組成 ，外層疏鬆的纖維層與內層致密的細胞層 ，纖維層中含有成纖維細胞 、膠原纖維 、彈力纖維及微管等 。細胞層中多為骨膜源幹細胞 ，這種幹細胞與骨髓來源的間充質幹細胞類似 ，具有多向分化的潛能 。

骨質修複 、重塑和更新與骨膜中的幹細胞密切相關 。在正常生理狀況下 ，骨膜組織發揮著維持骨質更新及重塑的作用 ，其中的幹細胞既可以通過膜內成骨方式分化為成骨細胞 ，也可通過軟骨內成骨方式分化為軟骨細胞 。

細胞特性 ：

1）細胞來源於實驗動物正常關節骨膜組織 。

2)細胞鑒定 ：CD90或CD73熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體、 、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：成纖維樣細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 DELF 原代間充質幹細胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠甘露聚糖結合凝集素關聯絲酸蛋白酶1(MASP1)檢測試劑盒  ，英文名 ： MASP1 ELISA Kit

Rat alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 大鼠αS轉移酶(α-GST)檢測試劑盒

Rateosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforE(Mouseesogen)ELISAKit小鼠雌激素

細胞培養汙染性支原體屬(Mycoplasma)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20次

RatImmunoglobulinA,IgAELISAKit大鼠免疫球蛋白A(IgA)檢測試劑盒

ST6GAL1重組小鼠 ST6GAL1 / CD75 蛋白 (His 標簽) Protein

RAS癌基因家族成員RAB37(RAB37)重組蛋白 Recombinant RAB37, Member RAS Oncogene Family (RAB37)

CRELD1重組人 CRELD1 蛋白 (His 標簽) Protein

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PDGFB Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PDGFB / PDGF-BB 蛋白

乙酰基酶(DLAT)重組蛋白 Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標簽)

IL13重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

CD38 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SCARB3 蛋白

NRN1L重組人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白  Protein

豬補體片斷3b(C3b)ELISA 試劑盒

Human Legionella aibody IgG (LP Ab-IgG) ELISA Kit 人軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)檢測試劑盒

Porcinediamineoxidase,DAOELISAKit 豬氧化酶(DAO)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforALOX-5(Humanarachidonate5-lipoxygenase)ELISAKit人花生四烯酸5脂加氧酶

血液卵0脂乙酰轉移酶(LCAT)活性酶連續循環反應比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseαmannosidase,αManaseELISAKit小鼠α甘露糖苷酶(αManase)檢測試劑盒

兔骨膜幹細胞中文名稱   方法   規格

小鼠糖皮質類固醇受體(GR)ELISAKit   ELISA. 

小鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISAKit   ELISA. 

小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.