老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

巨噬细胞源自单核细胞，属于细胞，有多种功能，属不繁殖细胞群
，难以长期培养。巨噬细胞在吞噬和异物和衰老死亡细胞

、分泌生物活性物质，调节血细胞生成与参与应答等方面发挥着广泛的生物学作用，是一类在体内发挥重要效应的细胞
，为体内的稳态维持和组织防御提供保障。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常骨髓组织。

2)细胞鉴定
：CD68或MAC387荧光染色为阳性

。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和

。

5)细胞生长方式
：圆形
，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 巨噬 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品：

猪环磷酸鸟苷(cGMP)elisa检测试剂盒

钾离子通道蛋白17抗体

KCNK17

G蛋白偶联受体ARHGEF18抗体

ARHGEF18

线粒体二羧酸载体蛋白抗体  Anti-SLC25A10

染色体浓缩调控蛋白1抗体  Anti-RCC1

螺旋环螺旋蛋白2抗体  Anti-NHLH2

乳腺癌相关基因2抗体（锌指蛋白364）  Anti-ZNF364/BCA2/RNF115

肌球蛋白1B抗体

MYO1B

3号染色体开放阅读框22抗体

C3orf22

转胺酶6抗体  Anti-TGase6/Transglutaminase 6

G蛋白信号调节因子14抗体  Anti-RGS14

老年性痴呆蛋白APH2抗体  Anti-Nicastrin

分泌素受体抗体  Anti-Secretin receptor

补体C3抗体

Complement C3

ATP-依赖的RNA解旋酶29抗体

DHX29

蛋白剪接变异体蛋白抗体  Anti-SVH/ARMC10

丙型肝炎NS4B（65kDa）抗体  Anti-Hepatitis C Virus RNA-directed RNA polymerase

GTP结合蛋白RAC1+RAC2抗体  Anti-RAC1+RAC2

甲状腺受体α1+α2抗体  Anti-THRA1+2

大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa分析检测试剂盒

大鼠弹性蛋白(ELN)elisa生化检测试剂盒

ELN ELISA Kit

山羊toll样受体2(TLR2)elisa生化检测试剂盒

兔骨髓巨噬细胞TLR2ELISAkit

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。