老哥俱乐部

实验报告

：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

结肠在右髂窝内续于盲肠，在第 3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部，大部分固定于腹后壁
，结肠的排列酷似英文字母M，将小肠包围在内。神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起
，由细胞体和细胞突起构成。

细胞特性
：

1）细胞来源于实验动物正常结肠组织
。

2)细胞鉴定：NSE荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、
、酵母和。

5)细胞生长方式：不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 神经元 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品：

MDHELISAKit

大鼠δ氨基乙酰丙酸脱水酶(ALAD)elisa分析检测试剂盒

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人花生四烯酸(AA)elisa分析检测试剂盒

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NAD依赖性甘油醛-3-磷酸脱氢酶（NAD-Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase；NAD-GAPDH）活性光谱法定量检测试剂盒

人20S蛋白酶体(20SP)elisa检测试剂盒

大鼠ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)elisa检测试剂盒

小鼠磷脂酶A2（PL-A2）elisa检测试剂盒

鱼CD8分子(CD8)elisa分析检测试剂盒

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人表皮生长因子(EGF)elisa分析检测试剂盒

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动物软骨组织细胞分离培养试剂盒

大鼠胰岛素受体β(ISR-β)elisa检测试剂盒

通用型A含量比色法定量检测试剂盒

小鼠SCAF11蛋白(SFRS2IP/CASP11)elisa检测试剂盒

转录因子源蛋白Nkx6.3抗体

Nkx6.3

8号染色体开放阅读框74抗体

C8orf74

突触融合蛋白结合蛋白5抗体  Anti-Tomosyn/STXBP5

磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗体  Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246)

低磷性佝偻病蛋白  Anti-PHEX

线性泛素链相关蛋白SHARPIN抗体  Anti-SHARPIN

Cy7标记的兔抗犬IgM抗体

猴白介素2(IL-2)elisa生化检测试剂盒

IL-2 ELISA Kit

人鹅膏蕈碱elisa生化检测试剂盒

兔结肠神经元细胞HumanAmanitinELISAKit

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。