細胞簡介 ：

結膜上皮是眼表的重要組成部分 ，是眼表的保護屏障 ，在維持淚膜的穩定性 、潤滑眼表 、維持正常視力和眼表上皮損傷修複中發揮重要作用 。上世紀 90 年代 ，隨著人們對眼表的深入研究 ，提出了結膜上皮幹細胞的概念 ，認為結膜上皮細胞的自我更新來自結膜上皮幹細胞 。

細胞特性 ：

1）組織來源於實驗動物的眼球 。

2)細胞鑒定 ：廣譜角蛋白（PCK）熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：扁平的橢圓形 、梭形或不規則形 ，不規則細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 DELF 原代 上皮 細胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ，，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

CIAPELISAKit

大鼠γ分泌酶elisa分析檢測試劑盒

Rat γ-secretase ELISA kit

人紅細胞生成素(EPO)elisa分析檢測試劑盒

EPOELISAKit

組蛋白H4-K12乙酰化檢測試劑盒

人Ⅱ型膠原交聯C端肽(CTX-Ⅱ)elisa分析檢測試劑盒

大鼠Apelin(APLN)elisa分析檢測試劑盒

小鼠膜聯蛋白A1(ANXA1)elisa檢測試劑盒

魚17-羥孕烯醇酮elisa分析檢測試劑盒

Fish 17-hydroxypregnenolone ELISA kit

人鞭毛蛋白(flagellin)elisa分析檢測試劑盒

HumanflagellinELISAKit

植物細胞周期M期步（SYNCHRONY）處理試劑盒

大鼠組織因子(TF)前體 elisa檢測試劑盒

細胞糖胺多糖（GAG）總含量阿爾新藍（alcian blue）比色法定量檢測試劑盒

小鼠白介素2受體β(IL2rb/CD122)elisa檢測試劑盒

P53誘導細胞凋亡抑製蛋白抗體

NME5

第8號染色體開放閱讀框78抗體

C8orf78

腫瘤壞死因子α誘導相互作用蛋白3抗體  Anti-TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3

磷酯酶Cγ1抗體  Anti-PLCG 1/PLC gamma 1

多聚合酶α抗體  Anti-PAPOA

抑製Hh信號通路蛋白SUFU抗體  Anti-SUFU/Suppressor of Fused

羅丹明標記的兔抗犬IgM抗體

魚胰島素樣生長因子1(IGF-1)elisa生化檢測試劑盒

IGF-1 ELISA Kit

人程序性細胞死亡因子4(PDCD4)elisa生化檢測試劑盒

兔結膜上皮細胞HumanPDCD4ELISAKit