實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

卵巢不僅是卵子產生 、生長並成熟的器官 ，也是腦垂體前葉分泌的靶器官之一 。其中 ，卵巢間質區是提供卵泡生長和發育的環境 ，卵巢間質主要由卵巢間質細胞構成。探明卵巢間質細胞的增值及功能 ，在發情周期和妊娠期發生變化的機理及調控因素 ，對進一步研究卵泡發育的調控 、排卵 、黃體形成和退化 、卵巢 、卵巢間質細胞瘤發病機理 ，以及在這些生理和病理過程中參與其中的及細胞因子作用機理均有重要意義 。

細胞特性 ：

1）組織來源於實驗動物的正常卵巢組織 。

2)細胞鑒定 ：側鏈裂解酶（P450SCC）熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：梭形細胞 ，不規則細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 DELF 原代 間質 細 胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

公司正在出售的產品 ：

人遊離（fCHOL）elisa檢測試劑盒

犬脂肪酸結合蛋白（FABP）elisa檢測試劑盒

組織二胺氧化酶（DAO）活性熒光定量檢測試劑盒

小鼠抗Smith抗體(Sm)elisa檢測試劑盒

大鼠膽囊收縮素A受體(CCKAR)elisa檢測試劑盒

活體細胞半胱-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒

人CXC趨化因子配體16(CXCL16)elisa分析檢測試劑盒

大鼠nNOSelisa檢測試劑盒

小鼠前列腺素E1(PGE1)elisa檢測試劑盒

鋅指蛋白677抗體 ZNF677

鋅指蛋白ZIC5抗體 ZIC5

腸致病性大腸杆菌抗體 E.coli

抗體 Atosiban, Acetate

E3泛素連接酶MUL1抗體 MUL1

ESF1蛋白抗體 ESF1

磷酸化蓬亂蛋白2抗體 phospho-Dishevelled 2 (Thr224)

磷酸化細胞核受體Rev-Erbα抗體 Phospho-NR1D1 (Ser55 + Ser59)

組蛋白去乙酰化酶7抗體 HDAC7

17-β-羥脫氫酶6抗體 HSD17B6

紅細胞分化相關基因蛋白抗體 Hemogen

環指蛋白74抗體 RNF74

PE-Cy5標記小鼠CD45RB單克隆抗體 mouse CD45RB/PE-Cy5

PE標記人CD26單克隆抗體 human CD26/PE

神經粘蛋白抗體 Neurocan

絲蛋白酶38抗體 Marapsin2/PRS38

蔗糖含量測試盒

HS3ST3A1蛋白抗體

HS3ST3A1

星形肌動蛋白抗體

兔卵巢間質細胞ASTN2

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。