老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

脐带血是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液

。脐带血中含有多种成分
。目前，脐带血已经成为的造血干细胞的重要来源之一。此外

，脐带血中还含有丰富的间充质干细胞。脐带血中的干细胞含量丰富，明显超过外周血含量，相当或超过骨髓中的含量，其间充质干细胞因其可以在体外诱导分化为多种组织细胞，以再生和修复病变或损伤的组织细胞，因此目前的应用比较广泛
。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物的脐血。

2)细胞鉴定：CD44荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品
：

兔半胱酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA 试剂盒

Rat aldehyde dehydrogenase (ALDH) ELISA Kit 大鼠乙脱氢酶(ALDH)检测试剂盒

Humanskieactivefactor/inflammatoryfactor,SRF/IFELISAKit 人皮肤反应因子/性因子(SRF/IF)检测试剂盒 进口分装

HumanGlycogenphosphorylaseII,GP-II检测试剂盒人糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒

组织蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanmonocytechemotacticprotein2,MCP-2ELISAKit人单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)检测试剂盒

CD3D重组食蟹猴 CD3d / CD3 delta 蛋白 (His 标签) Protein

MMP-2 基质金属蛋白酶-2(多肽抗原 0.5mgMMP-2 基质金属蛋白酶-2(多肽抗原)

CCL8重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签) Protein

ALOX15B Protein Human 重组人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白

BTLA Protein Mouse 重组小鼠 BTLA 蛋白

MMP-2 基质金属蛋白酶-2(多肽抗原 0.5mgMMP-2 基质金属蛋白酶-2(多肽抗原)

ALOX15B Protein Human 重组人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白

CD3D重组食蟹猴 CD3d / CD3 delta 蛋白 (His 标签) Protein

BTLA Protein Mouse 重组小鼠 BTLA 蛋白

CCL8重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签) Protein

猪促甲状腺素释放激素(H)ELISA 试剂盒

Human macrophage inflammatory protein 2 (MIP-2) ELISA Kit 人巨噬细胞性蛋白2(MIP-2)检测试剂盒

Porcinegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 猪生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlphaActin(HumanAlpha-Actin)ELISAKit人α肌动蛋白

血液0酸二酯酶4(PDE4)活性荧光定量检测试剂盒10次

Mouseα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit小鼠α羟基脱氢酶(αHBDH)检测试剂盒

兔脐带血间充质干细胞猪(HYD)ELISAKit   ELISA. 

猪(NO)ELISAKit   ELISA. 

猪内皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA. 

猪内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit   ELISA.

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。