老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

舌表皮细胞经常轻度教化脱落，与唾液和食物碎屑混合而形成一层白色薄苔。表皮细胞的主要作用是保护，同时还兼有其他功能

，如分泌角质层等
，具有很强的角质化特征。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常舌组织
。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV
、支原体
、
、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 角质形成 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品
：

小鼠载脂蛋白B100(Apo B100)elisa检测试剂盒

小鼠端粒酶关联蛋白1(TEP1)elisa检测试剂盒

大鼠Apelin受体(APLNR)elisa检测试剂盒

基因甲基化检测DNA修饰试剂盒

人Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)elisa检测试剂盒

细胞半胱-10（CASPASE-10）活性荧光定量检测试剂盒

人P物质（SP）elisa检测试剂盒

大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa分析检测试剂盒

小鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)elisa检测试剂盒

衰老标记蛋白30抗体 Regucalcin

丝/苏蛋白激酶Smg1抗体 SMG1

PE-Cy5标记小鼠CD3e单克隆抗体 Mouse CD3e/PE-Cy5

PE标记人CD24单克隆抗体 human CD24/PE

组蛋白去乙酰化酶5抗体 HDAC5

17β羟基类固醇脱氢酶13/17β-HSD13抗体 HSD17B13

红细胞2,3 - 二磷酸甘油酸合成酶抗体 BPGM

环指蛋白67抗体 NEURL

锌指蛋白925抗体 ZBTB42

细胞核蛋白1抗体 THYN1

促甲状腺α重组兔单克隆抗体 CGA

蛋亚砜还原酶B3抗体 MSRB3

ENGASE蛋白抗体 ENGASE

FAM199X蛋白抗体 FAM199X

磷酸化糖原合酶激酶-3α抗体 phospho-GSK3A (Ser21)

磷脂重塑基因SERAC1抗体 SERAC1

粪便基因组提取试剂盒 50次

大鼠弹力蛋白酶elisa生化检测试剂盒

Rat Elastase ELISA Kit

山羊M型肌酸激酶(CKM)elisa生化检测试剂盒

兔舌表皮细胞CKMELISAkit

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。