老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

集合管是由皮质走向髓质椎体孔的小管，沿途有许多肾单位的远曲小管与之相连
，管径逐渐变粗，管壁逐渐变厚

，管壁由柱状上皮构成
。集合管流的是小管液，肾脏血液经肾小球滤过，形成的原尿，进入肾小管后就称为小管液，小管液流向集合管进一步滤过和重吸收形成终尿
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肾脏组织
。

2)细胞鉴定
：细胞角蛋白-18（CK-18）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：铺路石状细胞
，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

公司正在出售的产品：

兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA 试剂盒

Rat alcohol dehydrogenase (ADH) ELISA Kit 大鼠乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒

Huma-lymphoopicvirusⅠ,HTLV-ⅠELISAKit 人类嗜T淋巴细胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)检测试剂盒 进口分装

HumanGlycatedAlbumin,GA检测试剂盒人糖化白蛋白(GA)检测试剂盒

组织蛋酸酶1(PP1)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanmonocyteierferongammainducingfactor,MIGFELISAKit人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIGF/CXCL9)检测试剂盒

NT5E重组食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白 (His 标签) Protein

MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A 0.5mgMAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微管相关蛋白1A抗原

IL2重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

ALOX15B Protein Human 重组人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白 (His & GST 标签)

WIF1 Protein Mouse 重组小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 (His 标签)

MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A 0.5mgMAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微管相关蛋白1A抗原

ALOX15B Protein Human 重组人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白 (His & GST 标签)

NT5E重组食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白 (His 标签) Protein

WIF1 Protein Mouse 重组小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 (His 标签)

IL2重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

猪促卵泡素(FSH)ELISA 试剂盒

Human macrophage inflammatory protein 1 beta (MIP-1 beta /CCL4) ELISA Kit 人巨噬细胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)检测试剂盒

PorcineEsogen,EELISAKit 猪雌激素(E)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlphaManase(MouseAlphamannosidase)ELISAKit小鼠α甘露糖苷酶

血液0酸二酯酶4(PDE4)活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒20次

Mouseα-L-iduronidase,IDUAELISAKit小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)检测试剂盒

兔肾集合管上皮细胞猪Ⅰ型前胶原羧基端肽检测试剂盒   猪Ⅰ型前胶原羧基端肽试剂盒   规格型号：96T/48T   猪Ⅰ型前胶原羧基端肽试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：猪Ⅰ型前胶原羧基端肽试剂盒、猪Ⅰ型前胶原羧基端肽检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

植物D2检测试剂盒   植物D2试剂盒   规格型号
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：检测试剂盒（进口分装），产品别名：植物D2试剂盒、植物D2 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

人Dickkopf1检测试剂盒   人Dickkopf 1试剂盒   规格型号：96T/48T   人Dickkopf 1试剂盒，规格型号

：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：人Dickkopf 1试剂盒、人Dickkopf 1 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

人CD14分子检测试剂盒   人CD14分子试剂盒   规格型号：96T/48T   人CD14分子试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：人CD14分子试剂盒、人CD14分子检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。