實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

腎上腺髓質位於腎上腺中心 。腎上腺髓質細胞分泌兩種 ：腎上腺素和 。腎上腺髓質細胞較大 ，呈多邊形 ，圍繞血竇排列成團或不規則的索網狀 ，細胞內含有細小顆粒 。

細胞特性 ：

1）組織來源於實驗動物的正常腎上腺組織 。

2)細胞鑒定 ：神經特異性烯醇化酶（NSE）熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：梭形細胞 ，不規則細胞，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 DELF 原代 上皮 細 胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

公司正在出售的產品 ：

豚鼠腎素(Renin)elisa檢測試劑盒

人白介素5受體alpha(IL5RA)elisa檢測試劑盒

細胞PKCη激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

小鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)elisa分析檢測試劑盒

大鼠饑餓(GHRL)elisa分析檢測試劑盒

動物多酚氧化酶（polyphenol oxidase ；PPO）活性比色法定量檢測試劑盒

人s腺苷型半胱(SAH)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠白蛋白啟動子D位點結合蛋白(DBP)elisa檢測試劑盒

小鼠髓細胞觸發受體1(TREM1)elisa檢測試劑盒

APC標記小鼠CD107b單克隆抗體 mouse CD107b/APC

BADH2(水稻)抗體 BADH2

跨膜蛋白132D抗體 TMEM132D

蛋白激酶SgK223抗體 PRAGMIN/Sgk223

X染色體開放閱讀框31抗體 CXorf31

β澱粉樣蛋白前體結合蛋白B-1抗體 APBB1 interacting protein 1

細胞毒性T細胞抗原-4（CD152）抗體 CTLA4

細胞角蛋白86抗體 KRT86

Kelch樣蛋白17抗體 KLHL17

LEPREL1蛋白抗體 LEPREL1

驅動蛋白結合蛋白1抗體 TRAK1

熱休克蛋白82抗體 HSC82

甘胺酸-N-酰基轉移酶樣1抗體 GLYATL1

幹擾素誘導的三角形四肽重複蛋白1抗體 IFIT1

早老素蛋白-2抗體 presenilin 2

脂肪源性胰島素增敏因子抗體 C1QTNF12

大鼠白介素15(IL15)elisa檢測試劑盒

大鼠S100-A5蛋白(S100A5)elisa生化檢測試劑盒

S100A5 ELISA kit

人胱天蛋白酶1(Casp-1)elisa生化檢測試劑盒

兔腎上腺髓質細胞Casp-1ELISAKit

注意事項：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。