老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

室管膜是覆盖在各脑室
、中脑水管
、脊髓中央管腔面的上皮

，由一层立方形、柱状或扁平上皮细胞构成
，来源于胚胎时期神经管的室管膜层

，是胚胎神经上皮的遗留物
。

神经干细胞是存在于哺乳动物体内的一种具有多向分化潜能和自我更新能力的细胞

，能分化为神经元和神经胶质细胞，其在神经系统中的替代前景广阔。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常脑或脊髓组织。

2）细胞鉴定
：Nestin荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体

、、酵母和
。

5）细胞生长方式

：集落
，克隆球状
，半贴壁半悬浮培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代神经干细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品：

人总抗氧化能力( T-AOC) ELISA 试剂盒

Rat adiponectin (ADP) ELISA Kit 大鼠脂联素(ADP)检测试剂盒

HumanGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit 人葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)检测试剂盒 进口分装

Humanheparinassociatedaibody,HIT检测试剂盒人抗肝素PF4复合物抗体/HIT抗体(HIT)检测试剂盒

组织肝脂酶活性比色法定量检测试剂盒20次

humanmajorvaultprotein,MVPELISAKit人主要穹窿蛋白(MVP)检测试剂盒

HA重组甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 维受体-β抗原

KLK7重组人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 标签) Protein

ALPP Protein Human 重组人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 标签)

FN1 Protein Human 重组人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 标签)

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 维受体-β抗原

ALPP Protein Human 重组人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 标签)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

FN1 Protein Human 重组人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 标签)

KLK7重组人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 标签) Protein

猪单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 试剂盒

Human macrophage derived chemokine (MDC/CCL22) ELISA Kit 人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)检测试剂盒

PorcineSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 猪超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha1-AGP(MouseAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit小鼠α1酸性糖蛋白

血液0酸二酯酶2(PDE2)活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒10次

Mouseβ-catenin,β-catELISAKit小鼠β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)检测试剂盒

兔室管膜细胞猪C反应蛋白(CRP)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。