實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

室管膜是覆蓋在各腦室 、中腦水管、脊髓中央管腔麵的上皮 ，由一層立方形 、柱狀或扁平上皮細胞構成 ，來源於胚胎時期神經管的室管膜層 ，是胚胎神經上皮的遺留物 。

神經幹細胞是存在於哺乳動物體內的一種具有多向分化潛能和自我更新能力的細胞 ，能分化為神經元和神經膠質細胞 ，其在神經係統中的替代前景廣闊 。

細胞特性 ：

1）組織來源於實驗動物的正常腦或脊髓組織 。

2）細胞鑒定 ：Nestin熒光染色為陽性 。

3）經鑒定細胞純度高於90% 。

4）不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5）細胞生長方式 ：集落 ，克隆球狀 ，半貼壁半懸浮培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 DELF 原代神經幹細胞培養體係 作為體外培養的培養基 。

公司正在出售的產品 ：

人總抗氧化能力( T-AOC) ELISA 試劑盒

Rat adiponectin (ADP) ELISA Kit 大鼠脂聯素(ADP)檢測試劑盒

HumanGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit 人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)檢測試劑盒 進口分裝

Humanheparinassociatedaibody,HIT檢測試劑盒人抗肝素PF4複合物抗體/HIT抗體(HIT)檢測試劑盒

組織肝脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

humanmajorvaultprotein,MVPELISAKit人主要穹窿蛋白(MVP)檢測試劑盒

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 維受體-β抗原

KLK7重組人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 標簽) Protein

ALPP Protein Human 重組人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 標簽)

FN1 Protein Human 重組人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 標簽)

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 維受體-β抗原

ALPP Protein Human 重組人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 標簽)

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein

FN1 Protein Human 重組人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 標簽)

KLK7重組人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 標簽) Protein

豬單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 試劑盒

Human macrophage derived chemokine (MDC/CCL22) ELISA Kit 人巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)檢測試劑盒

PorcineSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 豬超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha1-AGP(MouseAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit小鼠α1酸性糖蛋白

血液0酸二酯酶2(PDE2)活性酶連續循環光譜法定量檢測試劑盒10次

Mouseβ-catenin,β-catELISAKit小鼠β連環蛋白/聯蛋白(β-Cat)檢測試劑盒

兔室管膜細胞豬C反應蛋白(CRP)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬Bcl-2相關X蛋白(BAX)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。