老哥俱乐部

细胞简介：

毛囊的上皮是由表皮延伸而来
，主要分为外根鞘和内根鞘。其中，外根鞘相当于表皮的基底层和棘细胞层

，由数层不含色素的细胞组成。外根鞘细胞与表皮细胞相比具有更强的增殖活性。此外
，有研究表明
，胰岛素与 EGF对外根鞘细胞的增殖具有明显的促进作用。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常皮肤组织
。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-19((CK-19)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜


；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠白介素31(IL-31)elisa检测试剂盒

人醛固酮（ALD）elisa检测试剂盒

酵母菌YNB培养基

鱼球蛋白A(IgA)elisa分析检测试剂盒

大鼠双氢睾酮(DHT)elisa检测试剂盒

冰冻切片淀粉样蛋白（AMYLOID）染色试剂盒

人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa检测试剂盒

大鼠白三烯C4(LTC4)elisa分析检测试剂盒

小鼠纤溶酶原激活剂抑制物（PAI-1）elisa检测试剂盒

DNAJC11蛋白抗体 DNAJC11

D型-过氧化酶活化受体抗体 PPAR delta + beta

磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体 phospho-CaMK2 alpha (Tyr230)

磷酸化酶激酶γ1 PHKG1

表皮细胞表面抗原1/Esa1抗体 Flotillin 2

叉头蛋白S1抗体 FOXS1

腺苷酸活化蛋白激酶γ1抗体 AMPK gamma 1

锌指蛋白142抗体 ZNF142

OTUD1蛋白抗体 OTUD1

PE-Cy5标记人CD55单克隆抗体 human CD55/PE-Cy5

神经母细胞瘤源性分泌蛋白抗体 C1orf76

神经元核抗原抗体 NeuN

核糖核酸结合蛋白2抗体 PTBP2

黑色素瘤相关突变抗原1样蛋白1抗体 MUM1L1

转化生长因子β活化激酶1 TAK1

自噬相关蛋白9B抗体 ATG9B

大鼠过氧化物酶体生物合成因子2(PEX2)elisa检测试剂盒

植物2(VD2)elisa生化检测试剂盒

VD2 ELISA Kit

人催产素受体(OXTR)elisa生化检测试剂盒

兔外根鞘细胞HumanOXTRELISAKit