老哥俱乐部

细胞简介：

结肠在右髂窝内续于盲肠，在第 3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠
、横结肠
、降结肠和乙状结肠4部
，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母M，将小肠包围在内
。

神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起
，由细胞体和细胞突起构成。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物正常结肠组织。

2)细胞鉴定：NSE荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式

：不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代神经元细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 

，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

F-12营养培养基 500ml

Minibrain 抗体

Minibrain

1号染色体开放阅读框21抗体

C1orf21

组织IKKβ激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

人广谱细胞角蛋白(P-CK)elisa分析检测试剂盒

大鼠环加氧酶1(COX-1)elisa分析检测试剂盒

土壤铵态氮测试盒

蛋白激酶N2抗体

PKN2

巨噬细胞炎性蛋白16抗体

CCL16/LEC

辣椒素受体5抗体  Anti-TRPV5

细胞色素b245轻链抗体  Anti-p22-phox/Cytochrome b245 Light Chain

卷曲螺旋结构域蛋白139抗体  Anti-PUS10/CCDC139

磷酸化蛋白激酶Fyn/步原基因抗体  Anti-phospho-SLK/FYN (Tyr530)

Cy5.5标记的兔抗人IgA

Rabbit Anti-Human IgA / Cy5.5

EMC9蛋白抗体

EMC9

人白介素18结合蛋白(IL-18BP)elisa分析检测试剂盒

HumanIL-18BPELISAKit

猪骨形成蛋白2(BMP-2)elisa分析检测试剂盒

BMP-2ELISAKit

猴子α1微球蛋白(α1-MG)elisa分析检测试剂盒

分拣微管连接蛋白抗体  Anti-SNX25

辣根过氧化物酶标记的驴抗羊IgG H&L

Donkey Anti-Goat IgG H&L / HRP

小鼠结肠神经元细胞FRG2B蛋白抗体