老哥俱乐部

细胞简介：

结膜上皮是眼表的重要组成部分，是眼表的保护屏障
，在维持泪膜的稳定性、润滑眼表
、维持正常视力和眼表上皮损伤修复中发挥重要作用。上世纪 90 年代，随着人们对眼表的深入研究，提出了结膜上皮干细胞的概念，认为结膜上皮细胞的自我更新来自结膜上皮干细胞。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的眼球。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：扁平的椭圆形、梭形或不规则形
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 上皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 

，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

胃肠组织固着液（Hollande固着液）

KIAA0247蛋白抗体

KIAA0247

锚蛋白重复序列与SOCS盒蛋白13抗体

ASB13

羟赖（HYL）含量高效液相色谱定量检测试剂盒

人含球蛋白样环和上皮生长因子样域激酶2(Tie-2)elisa分析检测试剂盒

大鼠A(CsA)elisa检测试剂盒

植物总酚测试盒 50T/24样 比色法

脑特异性蛋白BPX抗体

NAP1L2

4号染色体开放阅读框33抗体

C4orf33

跨膜蛋白9家族成员4抗体  Anti-TM9SF4

磷酸化DNA修复蛋白NBS1抗体  Anti-Phospho-p95 NBS1 (Ser343)

胚胎干细胞关键蛋白1抗体  Anti-Oct-1

信号转导和转录激活因子2抗体  Anti-STAT2

磷酸化致癌基因C-Myc抗体

phospho C-Myc (Thr58 / Ser62)

DKK2抗体

DKK2

神经视锥蛋白样1抗体(神经钙蛋白)  Anti-VILIP1

核孔蛋白1抗体  Anti-NPAP1

核糖体蛋白L19抗体  Anti-RPL19

20号染色体开放阅读框11抗体  Anti-TWA1/C20orf11

大鼠促甲状腺素(TSH)elisa分析检测试剂盒

细胞信号转导分子SMAD3抗体  Anti-Smad3

Cy7标记的兔抗鸡IgM

Rabbit Anti-Chicken IgM / Cy7

小鼠结膜上皮细胞胞吞调控蛋白Eps15抗体