老哥俱乐部

注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温
。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好
。不同批号的试剂不要混用。保质前使用
。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感
，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样
。
9）按照说明书中标明的时间
、加液的量及顺序进行温育操作。

产品名称
：活化VELISA检测试剂盒
英文名称：activated coagulation factorV
产品货号：EY-E99247
产品规格：48T/96T
产品保存：2-8℃，有效期6个月
主要组成成分：试剂 
    性状

：液体 
    产品规格
：96T/48T 
    96T指可以做94个标本，2个标准对照 
    48T指可以做47个标本，1个标准对照 
    96T-84个样本 
    48T-42个样本 
    待检样本：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等。 

样品收集
、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激

。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测
。1000×g离心30分钟去除颗粒
。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量盐水捣碎
。1000×g离心10分钟
，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用
，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻
。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒
，检测前先离心或过滤
。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。

大龙手动大容量移液器（助理移液器）支

大龙移液器1000-5000ul支

大龙移液器100-1000ul支

大龙移液器0.5-10ul支

大龙移液器10-100ul支

β-甘油磷酸二钠盐10g瓶

Sulfamethoxazole 磺胺甲恶唑5g瓶

DEAE Sepharose CL-6B DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B100ml瓶

D(+)Galactosamine hydrochloride D-(+)氨基半乳糖250mg瓶

中性红染色液(0.33% 过滤除菌，活细胞染色)500ml瓶

PhosphoMycin disodiuM salt 钠5g瓶

DL-Aspartic acid DL-天25g瓶

G-418 Sulfate 遗传霉素100mg支

3M 乙酸钠(pH=5.2)500ml瓶

羊抗人白蛋白1mg支

活化VELISA检测试剂盒NA平板（加酶）（9cm） 10个/包 细菌计数、不含糖
，可作血琼脂基础和传代用

CIN-1琼脂平板（9cm） 10个/包 用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌

含酶TSA培养基平板（7cm） 10个/包 用于医药环境监测

含酶接触皿培养基平板（6.5cm） 10个/包 用于环境
、器皿、设备和表面的无菌检测

TSA培养基平板（9cm） 10个/包 用于环境、器皿
、设备和表面的无菌检测

RODAC培养皿（TSA）（6.5cm） 10个/包 用于环境
、器皿、设备和表面的无菌检测

改良Skirrow氏琼脂平板（9cm） 10个/包 用于弯曲杆菌的分离培养

卵黄多粘菌素琼脂平板（9cm） 10个/包 用于蜡样芽孢杆菌的固体平板计数

BCYE-CYS琼脂平板（9cm） 10个/包 用于军团菌的选择性分离培养

改良CCDA琼脂平板（9cm） 10个/包 用于弯曲杆菌分离培养

大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基平板9cm 10个/包 医药环境监测沉降菌、浮游菌

含酶TSA平板 9cm*10/包 用于医药环境监测

沙氏琼脂平板9cm（2~25℃） 9cm*10 用于真菌的分离培养

SDC(TSA W/TTC)平板 9cm*10个 用于微生物培养

ELISA 试验时，注意事项如下
： 
     1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高
，说明有非特异性反应
，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭
。 
     2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相载体的选择
：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯

、聚苯乙烯
、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选

：用等量抗原包被
，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗体（或抗原）的选择

：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度
，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值
。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。 
     （3） 酶标记抗体工作浓度的选择
：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）
。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物
、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度
。 
     （4） 酶的底物及供氢体的选择
：对供氢体的选择要求是价廉
、安全
、有明显地显色反应

，而本身无色
。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体
，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体
。底物作用一段时间后
，应加入强酸或强碱以终止反应
。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制
，尤其是H2O2在临用前加入 。