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原代細胞的分離與培養
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:2020-07-24
原代細胞是指來源活體組織
,經過特定分離方法製備而成的初始細胞
。
原代細胞離體時間短且不經過永生化過程
,其生物學特性未發生很大變化
,仍保持原有的遺傳特征
,可更好地反映細胞在體內的生長狀態
,從而獲得與體內生理功能更接近的數據
,很適合用於藥物測試
、細胞分化和轉化等實驗研究
。
原代細胞是出了名的難養
,對培養環境和實驗操作的要求更苛刻
。細胞在體外通常隻能傳代少數幾次
,某些細胞(如神經元細胞)甚至無法進行傳代
。對於研究人員來說
,如何才能經濟高效地培養好細胞,並圍繞這有限幾次傳代的細胞設計實驗
,是更大的一個挑戰
。
原代細胞是取材於切除的動物組織
,通過酶處理
,在適當的條件下培養直至達到足夠的數量
。分離的細胞有兩種類型
:貼壁細胞(錨定依賴性生長)和懸浮細胞(錨定非依賴性)
,貼壁細胞多來自器官組織
,而懸浮細胞多來自血液係統的細胞
。
從組織製備細胞
,即使捱過了極其嚴苛的解離步驟
,不嚴謹的分離操作可能會導致細胞生長緩慢
、表型不一致甚至細胞汙染
,特別是由於組織中可能含有細菌等微生物
,汙染問題對於細胞的分離和培養是一個很大的隱患。而為了讓研究人員不再為這些問題頭疼
,現在已經出現了一些細胞公司可供應現成的細胞
,並對應配有充分優化的培養基和實驗方案
,這使得細胞的培養和研究比以往要輕鬆得多
。
而對於具備自主從組織中獲取細胞的實驗室
,也建議以商業化的細胞作為對照
,采用均一性和穩定性更好的P2/P3代次進行實驗
,並用專門的細胞培養基進行培養
,zui大限度提高原代細胞的生長
。
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