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E2檢測ELISA試劑盒實驗小知識----顯色問題
點擊次數 :534 更新時間 :2020-05-26
  E2檢測ELISA試劑盒實驗中顯色是ELISA中的後一步溫育反應 ,此時酶催化無色的底物生成有色的產物 。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素 。在一定時間內 ,陰性孔可保持無色 ,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強 。適當提高溫度有助於加速顯色進行 。在定量測定中 ,加入底物後的反應溫度和時間應按規定力求準確 。定性測定的顯色可在室溫進行 ,時間一般不需要嚴格控製 ,有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯se情況適當縮短或延長反應時間 ,及時判斷 。
  OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鍾後即不再加深 ,再延長反應時間 ,可使本底值增高 。OPD底物液受光照會自行變色 ,顯色反應應避光進行 ,顯色反應結束時加入終止液終止反應 。OPD產物用硫酸終止後 ,顯色由橙黃色轉向棕黃色 。E2檢測ELISA試劑盒
  TMB受光照的影響不大 ,可在室溫中置於操作台上 ,邊反應觀察結果 。但為保證實驗結果的穩定性 ,宜在規定的適當時間閱讀結果 。TMB經HRP作用後 ,約40分鍾顯色達 ,隨即逐漸減弱 ,至2小時後即可*消退至無色 。TMB的終止液有多種 ,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑製劑均可使反應終止 。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪 ,是目視判斷的良好終止劑 。此外 ,各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色 ,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值 。E2檢測ELISA試劑盒
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