實驗中應該注意的問題 ，包括樣品稀釋 、試劑盒平衡 、樣品和試劑的混勻、加樣 、溫育等問題 ，希望對你有用處 。elisa試劑盒有著準確性高 、靈敏度高 、特異性強的諸多優點 ，深受廣大用戶朋友的喜愛 。然而 ，在實驗過程中 ，也需要注意很多問題 。對此 ，需要遵守一些規則 ，才能更好地進行實驗 ，取得較好的實驗成果 。Elisa方法被廣泛應用於各種抗原和抗體測定 。在Elisa測定中影響因素較多 ，在檢測過程中除正常反應外 ，有時常見到一些錯誤的結果 。下麵 ，老哥俱樂部一起看下需要注意的問題 ：
1．樣品稀釋
一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定 ，以保證試驗的靈敏度和特異性 。酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應 ，如果血清不稀釋 ，不可避免會產生很強的非特異性反應 ，出現假陽性 。
2．試劑盒平衡 
Elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20～30分鍾以上 。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠 ，樣品孵育時間相對縮短 ，ELISA反應不夠充分 。冬季室溫低 ，可將試劑盒置37℃溫箱20分鍾 。 
3．樣品和試劑的混勻
在稀釋前 、後的樣品必須充分混勻 ，所有試劑在加樣前也須搖勻 ，以保證試驗的均一性 。 
4．加樣
加樣是一項很重要的步驟 。加樣不可太快 ，要避免加在孔壁上部 ，不可濺出和產生氣泡 。加樣太快 ，無法保證微量加樣的準確性和均一性 。加在孔壁上部的非包被區 ，易導致非特異吸附 。
5．溫育
溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素 。ELISA作為一種固相免疫測定 ，抗原抗體的結合反應在固相上進行 ，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合 ，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間 。
6．洗板
固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術 ，需以洗滌操作將特異結合於固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來 ，以保證ELISA測定的特異性 。洗液盡量不要溢出孔外 ；加洗液後要靜置1分鍾 ，甩去板孔中洗液後 ，一定要大力拍幹 ；及時更換吸水紙 ，尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去 ，否則可能影響試驗結果 。
7．顯色
顯色一定要控製時間,根據試劑盒說明操作即可 。一般來說 ，顯色時間過短 ，結果偏低 ；顯色時間過長 ，空白增高或者非特異性顯色增加 。
Forskolin    40mg    66575-29-9     佛司可林標準品
Midodrine Related Compound A    40mg    3600-87-1     米多君相關物質A標準品
    40mg    256-81-5    賽庚啶相關物質A標準品
    40mg    54779-58-7     反苯環丙胺相關物質A標準品
    40mg    5586-89-0     苯環丙胺相關物質B標準品
    40mg        相關物質B標準品
    40mg        碘帕醇相關物質C標準品
8-Bromotheophylline    400mg    10381-75-6    8-溴標準品
Acetaminophen    400mg    103-90-2    標準品
Carbidopa    400mg    38821-49-7    標準品

 

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