洗滌在過程中雖不是一個反應步驟
，但卻也決定著實驗的成敗
。ELSIA就是靠洗滌來達到分離遊離的和結合的酶標記物的目的
。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質
，以及在反應過程中非特異性地吸附於固相載體的幹擾物質
。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的
，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的幹擾物質洗滌下來
。可以說在ELISA操作中
，洗滌是zui主要的關鍵技術
，應引起操作者的高度重視
，操作者應嚴格按要求洗滌
，不得馬虎
。
一般說來
，在5天內測定的血清標本可放置於4℃
，超過一周測定的需低溫冰存
。凍結血清融解後
，蛋白質局部濃縮
，分布不均
，應充分混勻宜輕緩
，避免氣泡
，可上下顛倒混和
，不要在混勻器上強烈振蕩
。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾
，澄清後再檢測
。反複凍融會使抗體效價跌落
，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測
，宜少量分裝冰存
。保存血清自采集時就應注意無菌操作
，也可加入適當防腐劑試劑的準備按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑
。ELISA中用的蒸餾水或去離子水
，包括用於洗滌的
，應為新鮮的和高質量的
。自配的緩衝液應用pH計測量較正
。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡後使用
。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存
。
在ELISA中一般有3次加樣步聚
，即加標本
，加酶結合物
，加底物
。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部
，避免加在孔壁上部
，並注意不可濺出
，不可產生氣泡
。加標本一般用微量加樣器
，按規定的量加入板孔中
。每次加標本應更換吸嘴
，以免發生交叉汙染
，也可用一次性的定量塑料管加樣
。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清
，可在試管中按規定的稀釋度稀釋後再加樣
。也可在板孔中加入稀釋液
，再在其中加入血清標本
，然後在微型震蕩器上震蕩1分鍾以保證混和
。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器
，使加液過程迅速完成
。在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應
，即加標本和加酶結合物後
。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間
，這一保溫過程稱為溫育（incubation）
，有人稱之為孵育
，在ELISA中似不恰當
。ELISA屬固相免疫測定
，抗原
、抗體的結合隻在固相表麵上發生
。以抗體包被的夾心法為例
，加入板孔中的標本
，其中的抗原並不是都有均等的和固相抗結合的機會
，隻有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸
。這是一個逐步平衡的過程
，因此需經擴散才能達到反應的終點
。在其後加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此
。這就是為什麽ELISA反應總是需要一定時間的溫育
。溫育常采用的溫度有43℃
、37℃
、室溫和4℃（冰箱溫度）等
。37℃是實驗室中常用的保溫溫度
，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度
。在建立ELISA方法作反應動力學研究時
，實驗表明
，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時
，產物的生成可達
。為加速反應
，可提高反應的溫度
，有些試驗在43℃進行
，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*
，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中
，以形成zui多的沉澱
。但因所需時間太長
，在ELISA中一般不予采用
。
2-氨基芴;2-芴胺 153-78-6
： 2-AMinofluorene;2-FluorenylaMine 英文名稱
：
2-氨基異丁酸;DL-2-氨基異丁酸;2-氨基異酪酸;DL-2-甲基;DL-2-氨基-2-甲基丙酸 62-57-7
： 2-AMinoisobutyric acid;DL-2-AMinoisobutanoic acid;DL-2-AMinoisobutyric acid;DL-2-Methylalanine;DL-2-AMino-2-Methyl propanoic acid 英文名稱
：
Hydroxyisopropylbenzene;β-Methylphenethyl alcohol;β-HydroxycuMene;Hydrotropic alcohol 英文名稱
：
2-苯基-2-丁烯醛 ≥97% 4411-89-6
： 2-PHENYL-2-BUTENAL 英文名稱
：
2-苯基-5(4-聯苯基)-1.3.4-惡二唑 15082-28-7
： 2-(4-tert-Butylphenyl)-5-(4-biphenyl)-1,3,4-oxadiazole 英文名稱
：
2-苯基乙胺;1-氨基-2-苯基乙烷;β-氨基乙苯 64-04-0
： 2-PhenylethylaMine;BenzeneethanaMine 英文名稱
：
2-苯基乙基丙酸酯 120-45-6
： 1-Phenylethyl propionate 英文名稱
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2-苯甲酰苯甲酸 85-52-9
： 2-Benzoylbenzoic acid 英文名稱
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