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GS elisa 試劑盒四大驗條件
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:781 更新時間
:2017-04-25
GS elisa 試劑盒四大驗條件
在GS elisa 試劑盒實驗中
,進行各項實驗條件的選擇是很重要的
,其中包括:
(1) 固相載體的選擇
:許多物質可作為固相載體
,如聚氯乙烯
、聚苯乙烯
、聚丙酰胺和纖維素等
。其形式可以是凹孔平板
、試管
、珠粒等
。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板
。不管何種載體
,在使用前均可進行篩選
:用等量抗原包被
,在同一GS elisa 試劑盒實驗條件下進行反應
,觀察其顯色反應是否均一性
,據此判明其吸附性能是否良好
。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇
:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表麵時
,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間
。GS elisa 試劑盒吸附溫度
,時間及其蛋白量也 有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時
。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定
:即用不同的蛋白質濃度(0.1
、1.0和10μg/ml等)進行包被後
,在其它試驗條件相同時
,觀察陽 性標本的OD值
。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度
。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml
。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇
:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)
。然後再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物
、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度
。
(4) GS elisa 試劑盒酶的底物及供氫體的選擇
:對供氫體的選擇要求是價廉、安全
、有明顯地顯色反應
,而本身無色
。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用
,應注意防護
。有 條件者應使用不致癌
、靈敏度高的供氫體
,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體
。底物作用一段時間後
,應加入強酸或強堿以終止反應
。通常GS elisa 試劑盒底物作用時間
,以10-30分鍾為宜
。底物使用液必須新鮮配製
,尤其是H2O2在臨用前加入
。
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