4.1 ELISA測試盒標本的采取和保存

可用作ELISA測試盒ELISA測定的標本十分廣泛 ，體液（如血清） 、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液 、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原 成份 。有些標本可直接進行測定（如血清 、尿液） ，有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物） 。大部分ELISA檢測均以血清為標本  。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外 ，其他成份均同等於血清 。製備血漿標本需借助於抗凝劑 ，而血清標本隻要待血清自然凝固 、血 收縮後即可取得 。除特殊情況外 ，在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本 。在ELISA中血漿和血清可同等應用 。血清標本可按常規方 法采集 ，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質 ，以HRP為標記的ELISA測定中 ，溶血標本可能會增 加非特異性顯色 。

血清標本宜在新鮮時檢測 。如有細菌汙染 ，菌體中可能含有內源性HRP ，也會產生假陽性反應 。如在冰箱中保存過久 ，其中的可發生聚合 ，在間接法ELISA中可使本底加深 。一般說來 ，在5天內測定的血清標本可放置於4℃ ，超過一周測定的需低溫冰存 。凍結血清

融解後 ，蛋白質局部濃縮 ，分布不均 ，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡 ，可上下顛倒混和 ，不要在混勻器上強烈振蕩 。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾 ，澄清後再檢測 。反複凍融會使抗體效價跌落 ，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測 ，宜少量分裝冰存 。保存血清自采集時就應注意無菌操作 ，也可加入適當防腐劑 。

4.2 ELISA測試盒試劑的準備

按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑 。 ELISA中用的蒸餾水或去離子水 ，包括用於洗滌的 ，應為新鮮的和高質量的 。自配的緩衝液應用pH計測量較正 。從冰箱中取出的試 驗用試劑應待溫度與室溫平衡後使用 。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存 。

4.3 ELISA測試盒加樣

在 ELISA中一般有3次加樣步聚 ，即加標本 ，加酶結合物 ，加底物 。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部 ，避免加在孔壁上部  ，並注意不可濺出 ，不可產生氣泡 。

加標本一般用微量加樣器 ，按規定的量加入板孔中 。每次加標本應更換吸嘴 ，以免發生交叉汙染 ，也可用一次性的定量塑料管加樣 。有此 測定（如間接法 ELISA）需用稀釋的血清 ，可在試管中按規定的稀釋度稀釋後再加樣 。也可在板孔中加入稀釋液 ，再在其中加入血清標本 ，然後在微 型震蕩器上震蕩1分鍾以保證混和 。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器 ，使加液過程迅速完成。

4.4 ELISA測試盒保溫

在 ELISA中一般有兩次抗原抗體反應 ，即加標本和加酶結合物後 。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間 ，這一保溫過程稱為溫 育(incubation) ，有人稱之為孵育 ，在ELISA中似不恰當 。

ELISA屬固相免疫測定 ，抗原 、抗體的結合隻在固相表麵上發生 。以抗體包被的夾心法為例 ，加入板孔中的標本 ，其中的抗原並不是 都有均等的和固相抗結合的機會 ，隻有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸 。這是一個逐步平衡的過程 ，因此需經擴散才能達 到反應的終點 。在其後加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此 。這就是為什麽ELISA反應總是需要一定時間的溫育 。

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