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      贝类超氧化物歧化酶ELISA检测试剂盒​操作步骤
      点击次数:636 更新时间:2022-02-08

      操作步骤:


      1. 标准品的稀释与加样 :在酶标包被板上设标准品孔10孔 ,在di一 、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl ,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中 ,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七 、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L ,30 ng/,15 ng/L)。

      2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟 。

      4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

      5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体 ,甩干,每孔加满洗涤液 ,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      6. 加酶 :每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

      7. 温育 :操作同3 。

      8. 洗涤 :操作同5。

      9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

      10. 终止 :每孔加终止液50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      11. 测定:以空白空调零 ,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟 。

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