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​小鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)ELISA試劑盒標本的采集與保存
點擊次數 :456 更新時間 :2022-01-11

標本的采集與保存:


1.         血清 :


將收集於血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜 ,然後 1000×g 離心 20 分鍾 ,取上清即可 ,或將上清置於-20oC 或-80oC 保存 ,但應避免反複凍融 。


2.         血漿 :


用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本 ,並將標本在采集後的 30 分鍾內於 2-8oC 1000×g 離心 15 分鍾 ,取上清即可檢測 ,或將上清置於-20oC或-80oC 保存 ,但應避免反複凍融 。


3. 組織勻漿 :


1) 取適量組織塊 ,於預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重後備用(組織塊較大需先剪碎後再勻漿) ;


2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果 :首先將組織塊移入玻璃勻漿器 ,加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨 ,該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿) ;得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反複凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫 ;反複凍融法可重複2次) 。


3) 將製備好的勻漿液於5000×g 離心5 分鍾 ,留取上清即可檢測 。


4. 細胞裂解液 :


1)貼壁細胞需要先用yi酶消化 ,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集) ;


2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次 ;


3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞 ,再反複凍融) :


i 超聲破碎 :取適量PBS 重懸細胞 ,用一定功率的超聲波處理細胞懸液 ,使細胞急劇震蕩破裂 。


ii 反複凍融 :將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍 ,室溫融解 ,反複3 次 ,使細胞溶脹破碎 。


4)將標本於2-8 oC 1500×g 離心10 分鍾 ,收集上清備用 。


5. 細胞培養上清或其它生物標本 :


請 1000×g 離心 20 分鍾 ,取上清即可檢測 ,或將上清置於-20oC 或-80oC 保存 ,但應避免反複凍融 。


注意 :


1.         以上標本均需密封保存 ,4oC保存應小於1周 ,-20oC不應超過1個月 ,-80oC不應超過2個月 。


2.         標本使用前應緩慢均衡至室溫 ,不應加熱使之融解 。


3.         實驗前紅細胞裂解液必須用標準品稀釋液稀釋 。

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