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      ​小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒标本的采集与保存
      点击次数:695 更新时间:2022-01-11

      标本的采集与保存:


      1.         血清:


      将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可 ,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融 。


      2.         血浆:


      用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC或-80oC 保存,但应避免反复冻融。


      3. 组织匀浆:


      1) 取适量组织块 ,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液 ,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);


      2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温 ;反复冻融法可重复2次) 。


      3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟 ,留取上清即可检测 。


      4. 细胞裂解液:


      1)贴壁细胞需要先用yi酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集) ;


      2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;


      3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):


      i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。


      ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻 ,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。


      4)将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟 ,收集上清备用 。


      5. 细胞培养上清或其它生物标本:


      请 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存 ,但应避免反复冻融 。


      注意:


      1.         以上标本均需密封保存,4oC保存应小于1周 ,-20oC不应超过1个月,-80oC不应超过2个月。


      2.         标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。


      3.         实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

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