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1-磷酸鞘氨醇檢測試劑盒操作步驟
點擊次數 :644 更新時間 :2021-10-05

操作步驟:


1 、準備 :從冰箱取出試劑盒 ,室溫複溫平衡30分鍾 。


2 、配液 :用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液 。


3 、加標準品和待測樣本 :取足夠數量的酶標包被板 ,固定於框架上 ,分別設置標準品孔 、待測樣本孔和空白對照孔 ,記錄各孔位置 ,在標準品孔中加入標準品50μL ;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL ,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍) ;空白對照孔不加 。


4 、溫育 :37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min 。


5 、洗板 :棄去液體 ,吸水紙上拍幹 ,每孔加滿洗滌液 ,靜置1min ,甩去洗滌液 ,吸水紙上拍幹 ,如此重複洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板) 。


6 、加酶標工作液 :每孔加入酶標工作液50μL ,空白對照孔不加 。


7、溫育 :37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min 。


8 、洗板 :棄去液體 ,吸水紙上拍幹 ,每孔加滿洗滌液 ,靜置1min ,甩去洗滌液 ,吸水紙上拍幹 ,如此重複洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板) 。


9 、顯色 :每孔先加入顯色劑A 液50μL ,再加入顯色劑B液 50μL ,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min 。


10 、終止 :取出酶標板,每孔加終止液50μL ,終止反應(顏色由藍色立轉黃色) 。


11 、測定 :以空白孔調零 ,在終止後15分鍾內 ,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值) 。


12 、計算 :根據標準品的濃度及對應的OD值 ,計算出標準曲線的直線回歸方程 ,再根據樣本的OD值 ,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度 ,也可以使用各種應用軟件來計算 。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數 。

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