操作步驟
：
1.標準品的稀釋與加樣
：在酶標包被板上設標準品孔10孔
，在第一
、第二孔中分別加標準品100μl
，然後在第一
、第二孔中加標準品稀釋液50μl
，混勻；然後從第一孔
、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔
，再在第三
、第四孔分別加標準品稀釋液50μl
，混勻
；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉
，再各取50μl分別加到第五
、第六孔中
，再在第五
、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻
；混勻後從第五
、第六孔中各取50μl分別加到第七
、第八孔中
，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl
，混勻後從第七
、第八孔中分別取50μl加到第九
、第十孔中
，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl
，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉
。
2.加樣
：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑
，其餘各步操作相同）
、待測樣品孔
。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl
，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）
。加樣將樣品加於酶標板孔底部
，盡量不觸及孔壁
，輕輕晃動混勻
。
3.溫育
：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾
。
4.配液
：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用
。
5.洗滌
：小心揭掉封板膜
，棄去液體
，甩幹
，每孔加滿洗滌液
，靜置30秒後棄去
，如此重複5次
，拍幹
。6.加酶
：每孔加入酶標試劑50μl
，空白孔除外
。
7.溫育
：操作同3
。
8.洗滌
：操作同5
。
9.顯色
：每孔先加入顯色劑A50μl
，再加入顯色劑B50μl
，輕輕震蕩混勻
，37℃避光顯色15分鍾.
10.終止
：每孔加終止液50μl
，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定
：以空白空調零
，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）
。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行
。