實驗規則 ：

1 、要保證移液槍的準確性 ，誤差不能超過2% 。可用水和電子天平進行確定 。但有專業人員進行矯正 。
2 、要配備20ul 、50ul 、100ul 、1000ul和排槍各一支 。吸取不同的液體後 ，要更換槍頭 。即使是吸取標準品時 。
3 、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出 ，使各種試劑都恢複到室溫 ，以使結果更穩定 。
4 、實驗時 ，要使底物避光保存 。
5 、用槍吸取液體時速度不能太快 ，以免產生氣泡而使吸取量不準確 。
6、吸取液體時 ，要用量程和需要量接近的槍去吸 ，減少誤差 。
7 、將液體加到酶標孔中時 ，避免槍頭和孔內液體接觸 ，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸 ，液滴會自然流下去 。
8 、液體全部加完後 ，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒 ，混勻液體 。也可以用酶標儀的晃動功能 。
9 、應盡量做雙孔實驗 ，這樣才能保證數據的準確性 。
10 、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證 。

探針法 ：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針 ，它的熒光與目的序列的擴增相關 。它與目標序列上遊引物和下遊引物之間的序列配對 。熒光基團連接在探針的5’ 末端 ，而淬滅劑則在3’ 末端 。當完整的探針與目標序列配對時 ，熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅 。但在進行延伸反應時 ，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切 ，使得熒光基團與淬滅劑分離 。隨著擴增循環數的增加 ，釋放出來的熒光基團不斷積累 。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關係 。相對於染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性

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