老哥俱乐部

实验规则：

1、要保证移液枪的准确性

，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定
。但有专业人员进行矫正
。
2、要配备20ul、50ul、100ul
、1000ul和排枪各一支
。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时
。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温
，以使结果更稳定
。
4
、实验时
，要使底物避光保存
。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确
。
6
、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸

，减少误差

。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触
，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能
。
9、应尽量做双孔实验

，这样才能保证数据的准确性。
10
、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证
。

探针法
：
aqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关

。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对
。荧光基团连接在探针的5’ 末端，而淬灭剂则在3’ 末端。当完整的探针与目标序列配对时
，荧光基团发射的荧光因与3’ 端的淬灭剂接近而被淬灭
。但在进行延伸反应时，聚合酶的5’ 外切酶活性将探针进行酶切

，使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。相对于染料法,Taqman探针法具有更高的特异性和准确性

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