的间接法 ：
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml ，每孔加0.1ml，4℃过夜。
2.次日洗涤3次。
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml ，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤 。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应 ：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 。
6. 结果判定 ：可于白色背景上 ，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强 ，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅 ，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色 ，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值 ，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍 ，即为阳性 。
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