雙抗體夾心法:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml
。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml
,4℃ 過夜
。次日
,棄去孔內溶液
,用洗滌緩衝液洗3次
,每次3分鍾
。(簡稱洗滌
,下同)
。
2. 加樣
:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中
,置37℃ 孵育1小時
。然後洗滌
。(同時做空白孔
,陰性對照孔及陽性對照孔)
。
3. 加酶標抗體
:於各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定後的稀釋度)0.1ml
。37℃ 孵育0.5~1小時
,洗滌
。
4. 加底物液顯色
:於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml
,37℃ 10~30分鍾
。
5. 終止反應
:於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
。
6. 結果判定
:可於白色背景上
,直接用肉眼觀察結果
:反應孔內顏色越深
,陽性程度越強
,陰性反應為無色或極淺
,依據所呈顏色的深淺
,以“+”
、“-”號表示
。也可測OD值
:在ELISA檢測儀上
,於450nm(若以ABTS顯色
,則410nm)處
,以空白對照孔調零後測各孔OD值
,若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍
,即為陽性
。
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