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      青蟹双顺反子病毒PCR检测试剂盒实验步骤
      点击次数 :710 更新时间:2021-03-24

      实验步骤 :
      ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
      ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang ,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层 。RNA全部被分配于水相中 。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
      ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中 。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA ,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
      ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制) ,清洗RNA沉淀。混匀后 ,4℃下7000rpm离心5分钟。
      ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
      ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次 ,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零 。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度 。

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