老哥俱乐部

　　使用过氧化物酶elisa 试剂盒进行试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件

，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性
。有时本底较高
，说明有非特异性反应。

　　在ELISA中
，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括
：

　　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体

，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等
。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板
。不管何种载体
，在使用前均可进行筛选
：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应

，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　包被抗体（或抗原）的选择
：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃18～24小时。过氧化物酶elisa 试剂盒蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1
、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度
。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml
。

　　除此之外还要注意以下事项：

　　1.确定elisa 试剂盒在有效期内；

　　2.仔细阅读说明书
；

　　3.按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）；

　　4.标本制备要规范
，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备，尽量分装做备份
。短期内无法实验者，注意低温保存；

　　5.根据检测标本数量确定所需试剂的量
；

　　6.准备好所有实验额外所需物品，如试管
、吸头、移液器、离心机等
；

　　7.过氧化物酶elisa 试剂盒按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂。