使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶
。*
,酶是一種有機催化劑
,很少量的酶即可誘導大量的催化反應
,產生可供觀察的顯色反應現象
。因此該體係常被稱為酶放大體係
。
1. 標準品的稀釋
:本試劑盒提供原倍標準品一支
,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋
。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣
:分別設空白孔
、標準孔
、待測樣品孔
。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl
,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl
,然後再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)
。加樣將樣品加於酶標板孔底部
,盡量不觸及孔壁
,輕輕晃動混勻
。|
3. 溫育
:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾
。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌
:小心揭掉封板膜
,棄去液體
,甩幹
,每孔加滿洗滌液
,靜置30秒後棄去
,如此重複5次
,拍幹
。
6. 加酶
:每孔加入酶標試劑50μl
,空白孔除外
。
7. 溫育
:操作同3
。
8. 洗滌
:操作同5
。
9. 顯色
:每孔先加入顯色劑A50μl
,再加入顯色劑B50μl
,輕輕震蕩混勻
,37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止
:每孔加終止液50μl
,終止反應(此時藍色立轉黃色)
。
11. 測定
:以空白空調零
,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)
。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行
。