操作步驟 ：

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條 ，剩餘板條用自封袋密封放回4℃ 。

2.  設置標準品孔和樣本孔 ，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL ；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL ；空白孔不加 。

4.  除空白孔外 ，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL ，用封板膜封住反應孔 ，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min 。

5.  棄去液體 ，吸水紙上拍幹 ，每孔加滿洗滌液（350μL） ，靜置1min ，甩去洗滌液 ，吸水紙上拍幹 ，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A 、B各50μL ，37℃避光孵育15min 。

7.  每孔加入終止液50μL ，15min內 ，在450nm波長處測定各孔的OD值 。

備注 ：

1.  標準品濃度依次為 ：800 、400、200 、100 、50 、25 pg/mL

2.  經過大量正常標本檢驗 ，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍內 ，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可 。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時 ，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋後再進行實驗 。

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