操作步驟 ：

1. 編號 ：將樣品對應微孔按序編號 ，每板應設陰性對照 2 孔 、陽性對照 2 孔 、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同）

2. 加樣 ：分別在陰 、陽性對照孔中加入陰性對照 、陽性對照 50%l 。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l，然後再加待測樣品 10%l 。加樣將樣品加 於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 ，

3. 溫育 ：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾 。

4. 配液 ：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用

5. 洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置 30 秒後棄去 ，如此重複 5 次 ，拍幹 。

6. 加酶 ：每孔加入酶標試劑 50%l，空白孔除外 。

7. 溫育 ：操作同 3 。

8. 洗滌 ：操作同 5 。

9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑 A50%l ，再加入顯色劑 B50%l ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15 分鍾.
10. 終止 ：每孔加終止液 50%l ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11. 測定 ：以空白空調零 ，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液後 15 分鍾以內進行 。

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