在中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的 ，其中包括:
（1）酶標記抗體工作濃度的選擇 ：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份） 。然後再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物 、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度 。 
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇 ：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表麵時 ，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間 。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時 。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定 ：即用不同的蛋白質濃度（0.1 、1.0和10μg/ml等）進行包被後 ，在其它試驗條件相同時 ，觀察陽性標本的OD值 。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度 。對於多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml 。
（3） 固相載體的選擇 ：許多物質可作為固相載體 ，如聚氯乙烯 、聚苯乙烯 、聚丙酰胺和纖維素等 。其形式可以是凹孔平板 、試管 、珠粒等 。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板 。不管何種載體 ，在使用前均可進行篩選 ：用等量抗原包被 ，在同一實驗條件下進行反應 ，觀察其顯色反應是否均一性 ，據此判明其吸附性能是否良好 。

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