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在中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1）酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）
。然后再固定其它条件或采取“方阵法"（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 
（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度
，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时
。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后
，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
（3） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯
、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板
、试管、珠粒等
。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选

：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应
，观察其显色反应是否均一性
，据此判明其吸附性能是否良好。

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