操作流程如下：
（1）待测样品孔中每孔参加待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔 ，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔 ，参加纯细胞裂解液100μl。 （2）酶标板置4℃，包被。
（3）洗板：吸干孔内反响液，用洗刷液过洗一遍（将洗刷液注满板孔后 ，即甩去） ，之后将洗刷液注满板孔 ，浸泡1-2分钟 ，间歇摇摆 。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗刷3-4次 。
（4）阴性对照孔每孔参加PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔参加1 ：500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内 ，孵育60min。
（6）洗板，同（4） 。
（7）每孔加1：5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl 。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，悄悄混匀10s，置37℃暗处反响15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反响。
（12）别离测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2 ，终究测得的OD值为两者之差（W1-W2） ，以削减由容器上的划痕或指印等形成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，核算S/N值 。S/N≥2.1为阳性断定规范。
注 ：所用溶液配方
(1) PBS：称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加双蒸水至1000ml 。
（2）包被缓冲液 ：称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加双蒸水至 1000m1。
（3）洗刷液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。
（4）稀释液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS，首要用以稀释抗体 、规范品、样品。
（5）TMB显色液：称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸，加双蒸水至1O0ml，配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB ，再参加35μl 3% H2O2
（6）细胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl ，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其间PMSF溶于异丙醇中，配成1O mmo/L，-20℃ 储存备用。
Carnosol 20mg 鼠尾草酚 5957-80-2
Caryophyllene oxide 20mg 石竹素 1139-30-6
Catalpol 20mg 梓醇 2415-24-9
Catechin 20mg 儿茶精； 儿茶素； (2R,3S)-2-(3,4-二羟基苯基)-3,4-二氢-2H-苯并吡喃-3,5,7-三醇 154-23-4
Caudatin 20mg 告达亭苷元 38395-02-7
Celastrol 20mg 红素; 南蛇藤素 34157-83-0
Cephalomannine 20mg 三尖杉宁碱 71610-00-9
Cepharanthine 20mg 千金藤素 481-49-2
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