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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒法檢測研討
點擊次數:984 更新時間 :2018-01-25

基因現已整合到銀耳基因組中 ;RT-PCR成果顯現 ,在銀耳細胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA ;Southern雜交成果表明人胰島素基因以單複製的方式整合到銀耳基因組DNA中 。本試驗經過設置農杆菌與銀耳芽孢不同共培育時刻 、誘導劑乙酰丁香酮的濃度 、銀耳芽孢及農杆菌ELISA試劑盒濃度等要素對轉化功率影響 ,成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL 、銀耳芽孢濃度為108個/mL 、農杆菌OD=0.5及共培育時刻為2d時 ,轉化功率zui高 ,為310個轉化子/108個銀耳芽孢 。轉化子轉接5代後對潮黴素仍有抗性 ,說明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳 。在試驗室已開始樹立的農杆菌EHA105介導銀耳轉基因辦法的基礎上 。
ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動身菌株 ,經過凍融法將帶著有潮黴素磷酸轉移酶(Hph)基因為遺傳符號及人胰島動物ELISA試劑盒素基因(BAC)為意圖基因的質粒pBHg-BCA導入根癌農杆菌GV3101 ,LBA4404和AGL-1中 ,並進一步介導轉究 。試驗結L-1具有較高的轉化率 ;GV3101轉化率較低 ,且假陽性較高 ;LBA4404無抗性菌落長出 。此成果表明不同的農杆菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性 ,且對受體侵染具有一定的特異性 。本試驗以農杆菌EHA105為參照菌株 ,對農杆菌AGL-1介導轉化銀耳進行研究 。基於農杆菌介導轉基因受許多要素的影響 ,本試驗從農杆菌與銀耳芽孢共培育時刻 、銀耳芽孢濃度 、農杆菌濃度 、誘導劑乙酰丁香酮(AS)的濃度 、轉率等方麵進行優化 。ELISA試劑盒其轉化條件優化成果為 :AGL-1菌液OD值為0.4~0.5 ,AS誘導培育濃度為250μg/mL 、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL ,共培育72h轉化率zui高 ,可達500個/10~8 ,且陽性菌落為89% ;EHA105菌液OD值為0.4~0.5 。
 LIX1IgG    小鼠血管緊張素原(aGT)
 Lpin1 IgG    小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ) 
 Lpin1 IgG    小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)
 L-型電壓依賴型鈣通道αIgG    小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)
 L-型電壓依賴型鈣通道βIgG    小鼠血管活性腸肽(VIP)
 L型鈣通道蛋白a1亞型3體IgG    小鼠溴脫氧核苷(BrdU) 
 L型鈣通道蛋白a1亞型6IgG    小鼠雄烯二酮(ASD)
 L型鈣通道蛋白IgG    小鼠性激素結合球蛋白(SHBG)
 L選擇素IgG    小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)
 L-脫羧酶IgG    小鼠心鈉肽(ANP)

 

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