技術的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記 。結合在固相載體表麵的抗原或抗體仍保持其免疫學活性 ,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性 ,又保留酶的活性 。在測定時 ,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表麵的抗原或抗體起反應 。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開 。再加入酶標記的抗原或抗體 ,也通過反應而結合在固相載體上 。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例 。加入酶反應的底物後 ,底物被酶催化成為有色產物 ,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關 ,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析 。由於酶的催化效率很高 ,間接地放大了免疫反應的結果 ,使測定方法達到很高的敏感度 。
(1)直接競爭酶標抗原法測抗原
樣本中的待測藥物和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合 ,經底物顯色後檢測 ,樣本中藥物含量愈高 ,結合在固相上的酶標抗原量愈少 ,zui後的顯色也愈淺 。
(2)直接競爭酶標抗體法測抗原
樣本中的待測藥物和固相抗原競爭結合一定量的酶標記抗體 ,經底物顯色後檢測 ,樣本中藥物含量愈高 ,結合在固相上的酶標抗體愈少 ,zui後顯色也愈淺 。
直接競爭法具體操作步驟如下 :
1)抗原(或抗體)的固相化 :將特異性抗原(或抗體)與固相載體聯結 ,形成固相抗原(或抗體) ,洗滌除去未結合的抗原(或抗體)及雜質 。
2)加入標準品/樣本 ,再加入酶標抗體(或酶標抗原) ,保溫反應 。樣本中藥物與固相抗原(或酶標抗原)同時競爭與特異性抗體(或固相抗體)結合 ,形成固相抗原-酶標抗體複合物(或抗體-酶標抗原複合物) 。洗滌除去遊離物質及吸附在固相載體上結合不緊密的物質 。
3)加底物顯色
,固相上的酶催化底物成為有色產物
。通過儀器檢測分析
,測知樣本中抗原的量
。
內標無含測 110791-9102 對二甲氨基苯甲醛 100mg
鑒別 110794-200504 土大黃苷 20mg
含量測定 110800-200404 吳茱萸內酯 20mg
含量測定 110803-200605 華蟾酥毒基 20mg
含量測定 110806-200704 30mg
含量測定 110811-200704 血竭素高氯酸鹽 20mg
含量測定 110812-200506 10-羥基-2-癸烯酸 50mg
鑒別 110815-200707 牛磺膽酸鈉 20mg
含量測定 110816-200507 牛磺鈉 20mg
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