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      夹心法抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒的实验方法
      点击次数:1364 更新时间:2017-09-21

      是一种分子量为8~10kD的多肽,对嗜中性粒细胞,T淋巴细胞 、嗜硷性粒细胞具有趋化作用 ,并可激活嗜中性粒细胞 ,是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8 。此外,近年来的研究表明,IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关 。老哥俱乐部采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8 ,敏感性可达156Pg/ml,操作简单,重复性良好,可用于IL-8的基础和临床研究。
      一、原理
               采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
      二、试剂器材
      1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品,底物(ABTS) 、96孔elisa板。
      2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。
      三、操作步骤
      1. 包被 :pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔,放4℃,36小时 。
      2. 封闭 :0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔 ,放37℃,1小时。
      3. 加待检样品:Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔,放37℃,3小时 。
      4. 加酶标抗体:Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加入96孔板 ,100μl/孔,放37℃,1小时 。
      5. 显色:Buffer A冲洗96孔板五次 ,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml,加入96孔板,100μ/孔,室温下或37℃显色。
      四 、注意事项
      1. 待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
      2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
      规格:    Multi-class antibodies    anti-Cathepsin L  组织蛋白酶L抗体     0.2ml
      规格 :    Multi-class antibodies    Anti-cath-G/CG /FITC  荧光素标记组织蛋白酶G抗体IgG     0.2ml
      规格:    Multi-class antibodies    Anti-cath-G/CG /FITC  荧光素标记组织蛋白酶G抗体IgG     0.2ml
      规格:    Multi-class antibodies    Anti-cath-H/CH /FITC  荧光素标记组织蛋白酶H抗体IgG     0.2ml
      规格:    Multi-class antibodies    Anti-cath-H/CH /FITC  荧光素标记组织蛋白酶H抗体IgG     0.2ml
      规格:    Multi-class antibodies    Anti-cath-K/CK /FITC  荧光素标记组织蛋白酶K抗体IgG     0.2ml
      规格:    Multi-class antibodies    Anti-cath-K/CK /FITC  荧光素标记组织蛋白酶K抗体IgG     0.2ml
      规格 :    Multi-class antibodies    anti-cath-L/CL /FITC  荧光素标记组织蛋白酶L抗体IgG     0.2ml

       

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