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原位雜交技術原理分析
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:2017-05-18
原位雜交技術的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列 ,將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織 、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對 ,結合成專一的核酸雜交分子 ,經一定的檢測手段將待測核酸在組織 、細胞或染色體上的位置顯示出來 。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件 :組織 、細胞或染色體的固定 、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針) 、有與探針結合的標記物) 。
RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交 。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術 。其基本原理是 :在細胞或組織結構保持不變的條件下 ,用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則 ,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交) ,所形成的雜交體 (Hybrids)經顯色反應後在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內相應的mRNA 、rRNA和tRNA分子 。RNA原位雜交技術 經不斷改進 ,其應用的領域已遠超出DNA原位雜交技術 。尤其在基因分析和診斷方麵能作定性 、定位和定量分析 ,已 成為zui有效的分子病理學技術 ,同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達方麵已展示了分子生物學的一重要方向 。
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