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肺表麵活性物質相關蛋白CElisa試劑盒包被的方式
點擊次數:1106 更新時間 :2017-05-09

將抗原或抗體固定在過程稱為包被 。換言之 ,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表麵的過程 。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的 ,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表麵的疏水基團間的作用力 。這種物理吸附是非特異性的 ,受蛋白質的分子量 、等電點 、濃度等的影響 。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的 ,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團 ,故更易吸附到固相載體表麵 。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力 ,其聯結多發生在Fc段上 ,抗體結合點暴露於外 ,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法 。蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被 。當抗原決定簇存在於或鄰近於疏水區域時 ,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露 ,在這種情況下 ,直接包被效果不佳 ,可以采用間接的捕獲包被法 ,即先將針對該抗原的特異抗體作預包被 ,其後通過抗原抗體反應使抗原固相化 。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表麵 ,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用 ,包被在固相上的抗原純度大大提高 ,因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法(見2.2.4) ,試驗的特異性 、敏感性均由此得以改善 ,重複性亦佳 。間接包被的另一優點是抗原用量少 ,僅為直接包被的1/10乃至於/100 。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式 。例如 ,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原 ,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合 。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射(例如30W紫外燈 ,75cm照射12小時) ,以增加其吸附性能 。固相載體先用堿性蛋白質 ,如聚賴氨酸 、等作預包被 ,也可提高核酸的結合力 。也可用親和素係 
統作間接包被 ,即用親和素先包被載體 ,然後加入化的DNA ,這種包被方法均勻 、牢固 ,已擴大應用於各種抗原物質的定量測定 。 
脂類物質無法與固相載體結合 ,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解後加入Elisa板孔中 ,開蓋置冰箱過夜或冷風吹幹 ,待酒精揮發後 ,讓脂質自然幹固在固相表麵 。抗心磷脂抗體的一般采用這種包被方式 。

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