對於間接ELISA標本一般都要進行稀釋
，如果加樣不準就會造成誤差
，尤其當稀釋倍數大時
，很小的誤差
，會導致較大的相對誤差
，使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）
。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部
，避免加在孔壁上部
，並注意不可濺出
，不可產生氣泡
。ELISA試劑盒目前
，大部分血站都已使用全自動酶免加樣係統處理標本
，可較好地避免以上誤差
。
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重複結果的關健一步
，應引起操作者重視
。無論是手工操作還是機器操作
，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關
，ELISA就是靠洗滌來達到分離遊離和結合的酶標記物的目的
。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質
，以及在反應過程中非特異性吸附於固相載體的幹擾物質
。
每種試劑都有其反應模式，其中溫度和溫育時間控製是重要因素。因孵育溫度高
，反應時間長
，會造成整板本底高
，陽性率高
。溫育一般用濕盒或水浴
，ELISA試劑盒反應板不宜疊放
，以保證各板溫度都能迅速平衡
，為避免蒸發
，板上應加蓋
。
作為記錄測定結果的儀器
，酶標儀的性能穩定與否
，決定結果的可靠度
。首先酶標儀應定期進行保養
，對濾光片要定期校正
；其次酶標儀波長設置要正確
，使用雙波長
，一個檢測波長
，一個參比波長
，以消除微孔板底部劃痕
、不平
、指印或液麵高度差異造成的光幹擾
。此外
，在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部並壓平板條
。由於各種酶標儀性能有所不同
，使用中應詳細閱讀說明書
綜上所述
，盡管目前上以及我國有了部分標準血清或參比血清（血清盤）
，但是酶聯免疫吸附技術目前在技術上尚未做到標準化
。受方法學及技術條件的限製
，在酶聯免疫吸附測定中有時不可避免的會出現一定的非特異性
，老哥俱樂部可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底，從而提高檢測的特異性
，並得到更準確
、可靠的實驗結果
。