試劑盒內容及其配製
人脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配製
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品
：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩衝液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
標記的抗IL-2抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩衝液 1瓶（60ml） 1瓶（30ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
自備材料
蒸餾水。
加樣器
：5ul、10 ul
、50 ul
、100 ul
、200、500 u
、1000lul
。
振蕩器及磁力攪拌器等
。
人脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒安全性
此試劑盒的人血製品中的HbsAg
、和抗HIV為陰性
，但沒有實驗室可*保證此血製品不會傳染肝炎
、AIDS或其它傳染病
，依據當地的安全條例處理本試劑盒裏的成份及血清和血漿等樣品
。
避免直接接觸終止液和底物A
、B
。一旦接觸到這些液體
，請盡快用水衝洗
。
實驗中不要吃喝
、抽煙或使用化妝品
。
不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存
，使用前恢複到室溫
。稀稀過後的標準品應丟棄
，不可保存
。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中
，密封保存
，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好
。不同批號的試劑不要混用
。保質前使用
。
使用一次性的吸頭以免交叉汙染
，吸取終止液和底物A
、B液時
，避免使用帶金屬部分的加樣器
。
使用幹淨的塑料容器配置洗滌液
。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品
。
洗滌酶標板時應充分拍幹
，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水
。
底物A應揮發
，避免長時間打開蓋子
。底物B對光敏感
，避免長時間暴露於光下
。避免用手接觸
，有毒
。實驗完成後應立即讀取OD值
。
加入試劑的順序應一致
，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣
。
按照說明書中標明的時間
、加液的量及順序進行溫育操作
。
人脫羧酶自身抗體ELISA試劑盒樣品收集
、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激
。使用不含熱原和內毒素的試管
。收集血液後
，1000×g離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
血漿-----EDTA
、檸檬酸鹽
、肝素血漿可用於檢測
。1000×g離心30分鍾去除顆粒
。
細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物
。
保存------如果樣品不立即使用
，應將其分成小部分-70 ℃保存
，避免反複冷凍
。盡可能的不要使用溶血或高血脂血
。如果血清中大量顆粒
，檢測前先離心或過濾
。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍
。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
試劑的準備
標準品
：標準品的係列稀釋應在實驗時準備，不能儲存
。稀釋前將標準品振蕩混勻
。稀釋比例按下表中進行
：
800 pg/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
。
400 pg/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 pg/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul
。
洗滌緩衝液（20×）的稀釋
：蒸餾水20倍稀釋
。
操作步驟
使用前
，將所有試劑充分混勻
。不要使液體產生大量的泡沫
，以免加樣時加入大量的氣泡
，產生加樣上的誤差
。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數
。每個標準品和空白孔建議做複孔
。每個樣品根據自己的數量來定
，能使用複孔的盡量做複孔
。
加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔
、加入待測樣品50ul於反應孔內
。立即加入50ul的標記的抗體
。蓋上膜板
，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育1小時
。
甩去孔內液體
，每孔加滿洗滌液
，振蕩30秒
，甩去洗滌液
，用吸水紙拍幹
。重複此操作四次
。如果用洗板機洗滌
，洗滌次數增加一次
。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP
，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育30分鍾。
甩去孔內液體
，每孔加滿洗滌液
，振蕩30秒
，甩去洗滌液
，用吸水紙拍幹
。重複此操作四次
。如果用洗板機洗滌
，洗滌次數增加一次
。
每孔加入底物A
、B各50ul
，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育15分鍾
。避免光照
。
取出酶標板
，迅速加入50ul終止液
，加入終止液後應立即測定結果
。
在450nm波長處測定各孔的OD值
。